[发明专利]一种汞-低密度脂蛋白螯合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种汞-低密度脂蛋白螯合物，其特征在于，该汞-低密度脂蛋白螯合物是汞离子与低密度脂蛋白螯合物通过巯基或/和半胱氨酸残基螯合而成。

2.制备如权利要求1所述的汞-低密度脂蛋白螯合物的方法，包括以下步骤：

A)汞-低密度脂蛋白螯合物的合成：在提纯源于人体的低密度脂蛋白或按照生物学方法重组的低密度脂蛋白中加入汞离子进行螯合反应，得反应溶液；

B)汞-低密度脂蛋白螯合物纯化：采用免疫亲和层析法，去除步骤A)反应溶液中未反应的低密度脂蛋白、特异性抗体和汞离子，即得汞-低密度脂蛋白螯合物。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，

所述步骤B)中具体包括以下步骤：

(1)溶解样品：将上述步骤A)的汞-低密度脂蛋白螯合物溶解于生理盐水中，得汞-低密度脂蛋白螯合物溶液；

(2)平衡层析柱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱的管路，在层析柱中装入能与低密度脂蛋白特异性结合的填料，装柱后，继续使用稀释缓冲液平衡层析柱；

(3)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(1)的溶液，然后上柱，使低密度脂蛋白与填料特异性结合；

(4)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.05-0.10mol/L的Na₂HPO₄溶液进行洗脱；

(5)收集：收集步骤(4)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；

(6)透析：将步骤(5)的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本；

(7)平衡层析柱：采用新的层析柱，用稀释缓冲液冲洗管路，在该层析柱中装入能与汞特异性结合的填料，装柱后再用稀释缓冲液平衡层析柱；

(8)上样：待层析柱平衡后，用稀释缓冲液稀释步骤(6)中样本，然后上柱；

(9)洗脱：使用稀释缓冲液冲洗层析柱至基线平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的Na₂HPO₄溶液进行洗脱；

(10)收集：收集步骤(9)的洗脱液，收集完毕后立即使蛋白复原；

(11)透析：将步骤(10)的洗脱液，装透析袋，用ddH₂O透析除盐，换水三次后，4℃透析过夜，收集样本，即得汞-低密度脂蛋白螯合物。

4.根据权利要求2所述的汞-低密度脂蛋白螯合物的制备方法，其特征在于，步骤B)后还包括步骤C)：对汞-低密度脂蛋白螯合物的鉴定；

其中，步骤C)中具体包括以下步骤：

(1)制备胶床：以琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶中的一种作为介质制备胶床；

(2)加样：取步骤B)中提取纯化得到的汞-低密度脂蛋白螯合物，加入上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；

(3)电泳：连接电泳板，进行电泳；

(4)检测：在胶床上找出含汞的蛋白条带，将该蛋白条带取出，将蛋白条带溶解，然后再采用ICP-MS或AAS检测是否含有汞以及检测汞的含量。

5.一种如权利要求1所述的汞-低密度脂蛋白螯合物在制备检测血样中汞-低密度脂蛋白螯合物的试剂或试剂盒中的应用。

6.一种至少包括如权利要求1所述的汞-低密度脂蛋白螯合物作为标准品的试剂盒。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括包被液，该包被液含有捕获低密度脂蛋白的蛋白或捕获金属汞的物质。

8.一种定量检测汞-低密度脂蛋白螯合物的方法，其特征在于，以已知含量的权利要求1所述的汞-低密度脂蛋白螯合物作为标准品，采用以下方法之一对样品进行检测：酶联免疫法、酶联免疫与原子吸收光谱结合法、酶联免疫与电感耦合等离子体质谱结合法、提纯汞-低密度脂蛋白螯合物与酶联免疫结合法、提纯汞-低密度脂蛋白螯合物与原子吸收光谱结合法、提纯汞-低密度脂蛋白螯合物与电感耦合等离子体质谱结合法、电泳与酶联免疫或原子吸收光谱或电感耦合等离子体质谱结合法。