[发明专利]一种蝎毒多肽B4及其分离纯化方法与应用

说明书

本发明公开一种蝎毒多肽B4及其分离纯化方法与应用。该蝎毒多肽B4的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，是从东亚钳蝎的蝎毒中分离得到的天然多肽。本发明得到的蝎毒多肽B4是一个小分子多肽，且纯度较高，引起过敏反应和其他不良反应的可能性很小，深入研究其对放化疗导致的骨髓造血功能和免疫功能损伤的恢复作用和机制，具有很好的临床应用前景。本发明的结果说明SVPB4对CTX所致的骨髓造血功能抑制和毒性作用具有显著的恢复和保护作用，为今后深入研究其作用和机制提供了充分的实验依据。

技术领域

本发明涉及一种蝎毒多肽B4(scorpion venom peptide B4，SVPB4)，具体涉及一种蝎毒多肽B4及其分离纯化方法与应用。

背景技术

全世界蝎目分6科，70属，约800余种，中国境内主要为东亚钳蝎，后者在历史上一直作为我国传统、名贵中药之一的“全蝎”而享誉海内外。蝎毒为蝎尾节毒囊中排泌出来的一种有毒分泌物，是全蝎治疗疾病的主要有效部位，其对肿瘤、疼痛、心血管疾病的疗效较全蝎强数倍。蝎毒以毒攻毒的药理作用是建立在全蝎及蝎尾千百年来大量临床应用的基础之上，具有鲜明的民族特色。

蝎毒是一个巨大的生物资源宝库，其中大部分是具有药理学活性的多肽类。目前，蝎毒中已分离出的蝎毒素大约有30种左右，主要是由35～70个氨基酸所组成的短肽，分子量约在4000～9000D之间，pH变化对蝎毒素的毒性影响不大，在加热至100℃并持续15～30min后，毒性依然较强。国外在蝎毒方面的研究始于十九世纪末，自上个世纪九十年代以来，蝎毒作为研究离子通道的工具及制作抗毒血清的原料而成为国际上研究的重点。从LQS蝎毒中分离出的氯毒素及charybdotoxin，对恶性神经胶质瘤细胞膜上的离子通道有特异的亲和作用，细胞的恶性度越高，氯毒素对它们的亲和作用越强。氯毒素与同位素结合后，其对胶质瘤的定向杀伤作用更为显著。此外，蝎毒素能够阻滞细胞膜的K⁺通道，同时导致Ca²⁺的内流减少，使肿瘤细胞的生长延缓。

我国在蝎毒方面的研究虽然起步晚，但在中医临床验证及理论体系(攻毒散结、通经活络、平肝熄风)的指导下，在抗肿瘤、抗痛、抗癫痫、抗凝、抗肝炎、抗风湿等领域均取得了丰硕的成果。

环磷酰胺(Cyclophosphamide，CTX)是一种临床常见的具有高治疗指数的烷化剂类抗肿瘤药物，广泛应用于各种癌症治疗，具有诱导肿瘤细胞凋亡和抑制细胞增殖的作用。但环磷酰胺可导致严重的副作用，如白细胞减少、骨髓抑制、免疫抑制和细胞毒作用。其中骨髓抑制可引起骨髓微环境、造血干细胞、造血细胞生长因子等的损伤，骨髓抑制引起的外周血细胞减少会导致严重感染、贫血以及严重出血，甚至导致死亡。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种蝎毒多肽B4。

本发明的另一目的在于提供上述蝎毒多肽B4的分离纯化方法。

本发明的再一目的在于提供上述蝎毒多肽B4的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种蝎毒多肽B4(scorpion venom peptide B4，SVPB4)，该蝎毒多肽B4是一种天然蝎毒多肽，该天然蝎毒多肽是从东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)蝎毒中分离的一种新的蛋白质。所述东亚钳蝎可以为野生或是任何一种市售的人工养殖的东亚钳蝎，如乌鲁木齐县东亚钳蝎良种繁育场、徐州新沂市浩大蝎子养殖场、金华市天道有毒生物科技开发有限公司等市售的东亚钳蝎。

其中，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示：

SEQ ID NO:1：CGPCFTTDANMARKFRECCGGIGKKFFPQQLLNN；

所述的蝎毒多肽B4是从东亚钳蝎的蝎毒中所分离得到的天然多肽，该蝎毒多肽B4的分离纯化方法，包括如下步骤：