[发明专利]一种抗人PD-1蛋白抗体及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一种抗人PD‑1蛋白抗体及其编码基因和应用，该抗体包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的三个高变区CDRH1、CDRH2、CDRH3的氨基酸序列分别为：GFTFSSYAMS、AISGSGGTTYYADSVKG、AWAPFVNSIVVVTANDL；其轻链可变区的三个高变区CDRL1、CDRL2、CDRL3的氨基酸序列分别为RASQGISTWLA、AASSLQS、QQANSFPI。本发明通过构建人单链抗体文库，采用核糖体展示技术筛选单链抗体，获得的抗人PD‑1蛋白抗体能特异结合人PD‑1蛋白，亲和力高，既能用于检测表达PD‑1的细胞，也可以作为治疗人体疾病的全人源抗人PD‑1抗体，有效预防和治疗肿瘤疾病。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，尤其涉及一种抗人PD-1蛋白抗体及其编码基因和应用。

背景技术

哺乳动物T细胞在免疫系统中扮演着极其重要的角色。T细胞仰赖抗原呈现细胞(antigen-presenting cells简称APC)或其他分子，将外来的或者有害的抗原消化并且重新呈现成T细胞可以识别的抗原型态，T细胞才得以活化。此过程受到许多分子精密的调节，有的分子会促进T细胞活化，以确保免疫系统足以对抗入侵的病原体；有的分子则扮演抑制的功能，防止免疫系统过度活化。

T细胞上有一群参与调节的蛋白质，被命名为CD28受体家族(Receptor Family)，包括：CD28、CTLA-4、PD-1(又称CD279)、ICOS以及BTLA等分子(Okazaki etal.Curr.Opin.Immunol，2002，14：391779-1782；Bennett F et al.J Immunol，2003，170：711-718；Hansen et al.Immunogenics，1980，10：247-260；Ishida et al.EMBO J，1992，11：3887-3895；Hutloff et al.Nature，1999，397：263-266)。在此家族中，CD28是首先被发现具有辅助受体功能的蛋白质，家族内的辅助受体分为两大类，一类是负责传递刺激讯号的活化性受体，另一类是传递抑制讯号的抑制性受体。在抗原呈现细胞(APC)上，则存在其对应的配体分子，隶属于B7家族。

T细胞的抑制性受体当中，最受瞩目的两个受体是细胞毒性T淋巴细胞抗原4(Cytotoxic T-Lymphocyte Antigen 4即CTLA-4)和计划性死亡蛋白-1(Programmed cellDeath Protein 1即PD-1，又称CD279)。至今所知，在抗原呈现细胞上，CTLA-4所对应的配体为B7-1和B7-2；而PD-1所对应的配体为PD-L1和PD-L2。人PD-1是个55kDa的I型跨膜蛋白，其编码基因属于免疫球蛋白(Ig)基因超级家族(superfamily)(Agata et al.IntImmunol，1996，8：765-772)。许多研究结果显示，PD-L1或PD-L2与PD-1的结合可以抑制T细胞的激活(Freeman et al.J Exp Med，2000，192：1027-1034；Latchman et al.Nat Immunol，2001，2：261-268；Carter et al.Eur J Immunol，2002，32：634-643)。PD-1主要表达于免疫细胞，如T细胞、B细胞和NK细胞，但很少在其他组织(如肌肉、表皮和神经细胞)中表达。此外，PD-1的高表达常常与免疫细胞的激活密切相关。这些分子如今被称为“免疫检查点”受体和配体。