[发明专利]一种利用发酵柠檬酸废菌丝体制备甲壳低聚糖的方法

权利要求书

1.一种从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将发酵柠檬酸的废菌丝体用水冲洗，过滤，收集，然后将收集到的废菌丝体晾干；

(2)将晾干的废菌丝体用0.3～0.6mol/L的碱溶液浸泡，过滤，然后水洗废菌丝体至滤液呈无色且pH≈7.0；

(3)将步骤(2)处理得到的废菌丝体用甲壳素酶降解制备得到甲壳低聚糖溶液；

(4)将甲壳低聚糖溶液通过制备型HPLC分离、收集得到甲壳低聚糖。

2.根据权利要求1所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，在甲壳素酶降解的同时加入灭活的蜗牛酶酶解破壁。

3.根据权利要求1所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，将步骤(2)处理得到的废菌丝体在甲壳素酶降解之前用蜗牛酶或纤维素酶酶解破壁。

4.根据权利要求3所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：所述的蜗牛酶或纤维素酶酶解破壁步骤，采用的酶解缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液，蜗牛酶或纤维素酶的用量为废菌丝体的4wt％，酶解温度为50℃，pH为5.6，酶解时间为4小时。

5.根据权利要求1～4任一项所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：步骤(1)中采用60目筛网过滤、300目筛网收集废菌丝体。

6.根据权利要求1～4任一项所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：步骤(2)中将晾干的废菌丝体用0.5mol/L的NaOH溶液浸泡8小时。

7.根据权利要求1～4任一项所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：步骤(3)所述的甲壳素酶为基因重组蛋白，其制备方法为：重组大肠杆菌经诱导、表达，然后经破碎、分离、纯化获得重组甲壳素酶。

8.根据权利要求1～4任一项所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：所述的甲壳素酶用量为废菌丝体的0.3wt％。

9.根据权利要求1～4任一项所述的从发酵柠檬酸的废菌丝体中制备甲壳低聚糖的方法，其特征在于：步骤(3)所述的甲壳素酶降解，降解温度37℃，降解pH为7.0-8.0，降解时间为4天，采用的酶解缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液。