[发明专利]一种产DHA的裂殖壶菌基因工程菌及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 201510417269.4 | 申请日： | 2015-07-15 |
| 公开（公告）号： | CN104974944B | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 黄和;莫凯强;纪晓俊;任路静;庄小燕;李干禄 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12P7/64 |
| 代理公司： | 南京汇盛专利商标事务所(普通合伙) 32238 | 代理人： | 袁静 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 裂殖壶菌 基因工程菌 构建 苹果酸酶基因 同源重组 表达盒 制备 种子培养基培养 生物化工技术 发酵培养基 工程菌 基因组 启动子 终止子 整合 应用 高产 筛选 | ||
1.一种产DHA的裂殖壶菌基因工程菌，是在裂殖壶菌基因组中整合有苹果酸酶基因的表达盒的工程菌，所述苹果酸酶基因的表达盒依次含有启动子、苹果酸酶基因和终止子；所述启动子为泛素启动子，所述苹果酸酶基因如SEQ ID NO:1所示，所述终止子为泛素终止子；所述整合位点为18srDNA。
2.权利要求1所述裂殖壶菌基因工程菌的构建方法，其特征在于构建含有苹果酸酶基因的表达盒的同源重组片段；将所述同源重组片段导入裂殖壶菌进行同源重组，筛选获得所述裂殖壶菌基因工程菌。
3.根据权利要求2所述裂殖壶菌基因工程菌的构建方法，其特征在于所述同源重组片段中在所述苹果酸酶基因的表达盒的两端设有18srDNA的上、下游同源臂，所述18srDNA的上游同源臂序列如SEQ ID NO:2所示，18srDNA的下游同源臂如SEQ ID NO:3所示。
4.根据权利要求3所述裂殖壶菌基因工程菌的构建方法，其特征在于所述同源重组片段携带有博莱霉素抗性标记基因。
5.采用权利要求1所述裂殖壶菌基因工程菌制备DHA的方法，其特征在于采用种子培养基培养裂殖壶菌基因工程菌，然后转接入发酵培养基制备DHA；所述种子培养基含有：葡萄糖 40g/L、酵母膏 2g/L、谷氨酸钠 10g/L、KH
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