[发明专利]用于特异性检测结核分枝杆菌感染的蛋白

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及用于特异性检测结核分枝杆菌感染的蛋白。

背景技术

我国体外诊断产业现正处于快速增长时期。然而巨大的市场需求与我国诊断试剂行业相对落后的自主研发能力存明显的差距。如何从源头上开展自主创新，如何在诊断试剂原材料供应上不受制于个别境外医药巨头，如何将现有的生物医药领域的科研成果转化为产品是我国政府、科研院所和医药行业在近年来都非常关注的热点。并且现今市场上对更灵敏、高效的诊断试剂提出了刚性需求，能够快速准确的确诊结核病患者对于医务工作者和病人本人都具有重要意义。

近年来数据调查结果显示，有结核病症状的患者76.6％接受过结核病病前相关检查，但是仅有35.8％被诊断为肺结核患者，提高病人发现率仍是当前结核病防治工作的重点也是难点。

利用抗原特异性T细胞的细胞免疫反应进行病原微生物感染的体外诊断，是近年发展起来的一种新的检测方法。通过分离新鲜全血中的外周血单核细胞并进行刺激培养，然后利用ELISPOT检测能够分泌IFN-γ的细胞的数量。该方法目前主要应用于结核分枝杆菌感染的诊断。目前临床普遍采用的结核诊断主要依赖于临床症状、影响学诊断和病原学诊断，对结核分枝杆菌潜伏性感染的诊断不敏感。同时，在结核病筛查过程中，直接检测病原体或检测结核分枝杆菌抗体的灵敏度和特异性也不理想。

T-SPOT.TB是一种更简单的酶联免疫斑点(ELISPOT)检测方法。ELISPOT检测是高灵敏度的，在细胞分泌的细胞因子扩散稀释前，其能够立即捕获细胞周围所分泌的细胞因子。这使得ELISPOT检测更加的灵敏，超过传统的ELISA实验。T-SPOT.TB被设计出来用于检测结核特异抗原刺激活化的效应T细胞。T-SPOT.TB记数每个活化的结核特异效应T细胞。

发明内容

本发明的一个目的是提供Rv0054蛋白的用途。

本发明提供Rv0054蛋白在制备检测或辅助检测结核分枝杆菌产品中的应用；

所述Rv0054是如下a)或b)的蛋白：

a)序列表中的序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

b)将序列表中的序列2的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与序列2所示蛋白具有相同功能的由a)衍生的蛋白质。

上述Rv0054蛋白在制备检测或辅助检测待测患者是否感染结核分枝杆菌产品中 的应用也是本发明保护的范围。

本发明的另一个目的是提供一种检测或辅助检测待测样本是否感染结核分枝杆菌的产品。

本发明提供的产品，包括Rv0054蛋白。

上述产品还包括阳性质控和空白对照；

所述阳性质控为植物血凝素PHA；

所述空白对照为无抗原的细胞培养液。

上述产品中，所述产品还包括记载如下内容的可读载体：

若空白对照孔和检测孔的斑点数符合如下标准：空白对照孔的斑点数为0-5个，且检测孔的斑点数-空白对照孔的斑点数≥5，则待测样本感染或候选感染结核分枝杆菌；若空白对照孔和检测孔的斑点数不符合上述标准，则待测样本未感染或候选未感染结核分枝杆菌；

所述空白对照孔为空白对照所在孔，

所述检测孔为所述Rv0054蛋白所在孔。

上述产品为试剂盒，上述试剂盒具体为T-SPOT试剂盒，也可以为ELISA试剂盒。

上述T-SPOT试剂盒还包括T-SPOT试剂盒中的微孔培养板、浓缩标记抗体、显色底物溶液。上述试剂盒为Oxford immunotec(英国)的产品。

本发明第三个目的是提供一种用于鉴别、诊断、辅助诊断、筛查和/或辅助筛查结核分枝杆菌的标志物。

本发明提供的标志物，为Rv0054蛋白。

本发明的实验证明，本发明筛选了结核分枝杆菌来源的蛋白片段，提供了一种检测结核病的结核分枝杆菌标识物抗原RV0054，通过该抗原来体外检测特异性T细胞免疫反应，可以作为诊断结核病患者的参照，用于诊断患者是否被结核分枝杆菌感染。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

部分试剂如下：

lysis buffer：20mM Tris-HCl、500mM氯化钠、10％甘油、pH 8.0