[发明专利]一种鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白的重组蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是一种鱼类(半滑舌鳎)肿瘤坏死因子家族蛋白(CsTNF)的重组蛋白及其应用。

背景技术

肿瘤坏死因子(Tumornecrosisfactor,TNF)是一种重要的细胞因子，能调节脊椎动物和无脊椎动物器官发育、组织修复、造血作用以及炎症反应等多个生理过程。肿瘤坏死因子能够调控单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞的多种免疫反应，诱导细胞增殖、凋亡和坏死。肿瘤坏死因子家族分为三类：TNF-α、TNF-β和LT-β。TNF-α是一个26kDa的膜蛋白，被金属蛋白酶水解后形成游离的约17kDa的激活蛋白。激活形式的TNF-α与细胞表面的肿瘤坏死因子受体结合，发挥其免疫调控作用。目前，肿瘤坏死因子已在多种鱼类中发现，但是其功能和应用性研究尚缺乏。

发明内容

本发明目的在于提供一种鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白(TNF-α型)的重组蛋白及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白的重组蛋白，鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF重组蛋白为半滑舌鳎的肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF重组蛋白，其是以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物TNFF1和TNFR1进行PCR扩增肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF基因，扩增产物经诱导表达、纯化即为重组蛋白，所述TNFF1为5’-GATATCATGAGGCAACATAATAGCTCACCT-3’；TNFR1为5’-GATATCCAAGGCGAACACGCCGAAG-3’。

一种鱼类肿瘤坏死因子家族蛋白的重组蛋白的应用，所述半滑舌鳎的肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF重组蛋白可应用于制备抑制细菌或病毒感染的制剂。

所述抗感染的细菌为荧光假单胞菌；病毒为细胞肿大病毒。

本发明具有如下优点：本发明的肿瘤坏死因子家族蛋白属于TNF-α型，能够显著提高鱼类的抗细菌和抗病毒能力。

附图说明

图1为本发明实施例提供的纯化的重组肿瘤坏死因子家族蛋白(命名为rCsTNF)电泳图。泳道1，分子量标准；泳道2,肿瘤坏死因子家族蛋白rCsTNF。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。

2.大肠杆菌用Hanahan方法(SambrookandRussell:MolecularCloning:ALaboratoryMannual.ColdSpringHarborLaboratoryPress2001)。

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“纽英伦生物技术有限公司”，北京。

实施例1

肿瘤坏死因子家族蛋白重组蛋白rCsTNF的制备

1)表达肿瘤坏死因子家族蛋白重组蛋白rCsTNF的质粒pCsTNF的构建：

本发明的肿瘤坏死因子家族蛋白CsTNF属于TNF-α型，其序列已公布(GenBankaccessionnumberXP_008330028.1)：

MDSECRVQLDVTDRDGEVREEPTPGVQARSKLTKAVLVLTVCLAAAAALLLVFYRQHNSSPQEEDSFELHHTLRQMSHVRAAIHLQGVHNPKMTNSVEWQDEVEQTHSQGGLKLDNNEVVIPHHGLYFVYSQVSFQVSCGDADVGAVSSPQVHLSHTVQRWSSSFGSDKVKSYRTILHSARTVCQKTASADSADEGSSFAAVYMGAVFNLLKGDRLRTVMEENMLPFLEDDPGKSFFGVFAL