[发明专利]一种原代肝组织细胞分离系统及分离方法

权利要求书

1.一种原代肝组织细胞分离系统，由控制面板（26）、循环泵管路（25）、细胞分离盒（28）和细胞富集瓶（27）组成，其特征在于，

所述控制面板（26）上分别设有显示屏（1）以及控制储液管中的磁力搅拌旋钮（5）、控制循泵旋钮（4）、水浴锅温度控制旋钮（3）、液压监测控制旋钮（2）；

所述循环泵管路（25）包括储液罐（8）和滚压式泵（9），储液罐（8）通过循环管路（11）连接在滚压式泵（9）的进口，滚压式泵（9）出口上连接的循环管路（11）上安装有液压温度监测器（10），储液罐（8）内放置有磁力搅拌转子（7），储液罐（8）放置在内恒温水浴锅（6），恒温水浴锅（6）放置在磁力搅拌装置上；

所述细胞分离盒（28）的两端分别设有第一螺旋接口（12）和第二螺旋接口（18），第一螺旋接口（12）与滚压式泵（9）出口的循环管路（11）连接，细胞分离盒（28）的内部前端设有与第一螺旋接口（12）连接的多项接头（13），所述细胞分离盒（28）内设有孔径依次减小的第一筛网（15）、第二筛网（16）和第三筛网（17），所述第一筛网（17）与多项接头（15）之间设有组织灌注槽（14）；

所述细胞富集瓶（27）包括富集瓶体（21），富集瓶体（21）顶端通过富集瓶导管（19）连接第二螺旋接口（18），富集瓶导管（19）上安装有富集瓶上开关（20），富集瓶体（21）内设有细胞筛（22），富集瓶体（21）下端通过分离瓶下导管（24）连接在储液罐（8）内，分离瓶下导管（24）上安装有富集瓶下开关（23）。

2.根据权利要求1所述的原代肝组织细胞分离系统，其特征在于，所述细胞分离盒（28）的构型为一个由窄至宽的立体梯形，且第一螺旋接口（12）设置在细胞分离盒（28）的窄端，第二螺旋接口（18）设置在细胞分离盒（28）的宽端。

3.根据权利要求1所述的原代肝组织细胞分离系统，其特征在于，所述第一筛网（15）的孔径为300目，第二筛网（16）的孔径为200目，第三筛网（17）的孔径为100目。

4.一种如任一权利要求1～3所述的原代肝组织细胞分离系统的分离方法，其特征在于，具体步骤如下：

（1）通过控制面板掌控系统的运行，保证工作环境的调控及监测；

（2）将新鲜采集的无菌肝组织样本放入细胞分离盒内的组织灌注槽内，若组织块较大，则分割成小块后放入多个细胞分离盒中，多个细胞分离盒并联同时运行；

（3）根据组织情况，把多项接头连接上导管或者穿刺针，对肝组织样本进行门脉连接或者多点穿刺；

（4）在储液罐中加入无菌生理盐水，并调节控制面板上的温度控制旋钮调控储液罐中生理盐水的温度至37℃，打开循环泵控制旋钮控制滚压式泵启动，使生理盐水对肝组织进行初步灌注清洗2min，排除腔隙中的血细胞以及杂质；

（5）把第一筛网、第二筛网和第三筛网按顺序插入细胞分离盒的相应卡槽中，扣上盒盖，并将储液罐清洗干净，置换无菌细胞分离液；

（6）再次打开磁力搅拌旋钮、温控控制旋钮和循环泵控制旋钮，储液罐中的细胞分离液充分混匀，并加热至37℃，随循环泵管路进入细胞分离盒，通过细胞分离盒前部的多项接头，分别有三个导管或者穿刺针对肝细胞进行持续灌注，细胞分离液与肝组织充分接触同时伴有持续稳定的灌注压；

（7）分离下来的肝细胞及组织随循环液依次流经第一筛网、第二筛网和第三筛网，将单细胞悬液汇聚细胞富集瓶中，含有胶原酶的细胞分离液分离循环回储液罐中；

（8）待肝组织细胞分离完毕，先关闭循环泵控制旋钮，再关闭富集瓶上开关和富集瓶下开关，取下富集瓶体，完成原代细胞分离。