[发明专利]一锅法从发酵液中提取利普司他汀的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种利普斯他汀的纯化方法。

背景技术

利普斯他汀（Lipstatin）是毒三素链霉菌（Streptomycestoxytricini）的代谢产物，是人体胃肠道胰腺脂肪酶抑制剂，减少人体对是高脂食物的分解和吸收，本身可以作为减肥药物，但是由于利普斯他汀是不饱和脂肪酸，在空气中易氧化，不稳定，罗氏公司通过加氢反应将利普斯他汀合成四氢衍生物，即是著名减肥药奥利司他。

目前，奥利司他的生产工艺有两种：一种是全化学合成法，工艺路线长、收率低、成本较高；第二种是微生物半合成法，即先利用毒三素链霉菌发酵生成利普斯他汀，再通过化学加氢反应生成奥利司他。在微生物半合成法中，利普斯他汀的分离纯化成本几乎占整个纯化成本的一半，而且纯化后利普斯他汀的质量对奥利司他的合成成本和质量有重要影响。

专利CN102993134A公开了一种利普斯他汀的提纯方法。该方法通过萃取、浓缩、溶解、过滤、柱层析和结晶等步骤分离纯化利普斯他汀，得到的利普斯他汀重量含量75-85%，HPLC纯度>97%，收率72%。该方法虽然纯化效果较好，但步骤较多，工艺复杂，需要多种设备投入，生产成本较高。专利CN102558104A公开了一种利用超临界CO₂流体萃取，并通过短程蒸馏获得纯度为94%的利普斯他汀，收率为50%。该方法不适宜工业化大规模应用，设备投入大，生产成本高。另外，胡为民等描述了一种利普斯他汀提取工艺，包括萃取、超声细胞破碎、乙酸乙酯萃取、正相色谱层析以及制备柱色谱制备，获得纯度94%的利普斯他汀。该方法步骤冗长，且未说明含量和收率。

发明内容

本发明公开的利普斯他汀提取工艺可以在一个多功能提取罐中实现，减少了提取纯化步骤，提高了提取收率，并减少了设备投资，降低了生产成本；同时纯化后的利普斯他汀质量能满足下游奥利司他的制备要求。

本发明的技术方案主要是毒三素链霉菌发酵利普司他汀结束后，将发酵液转移至多功能罐中，加入无机酸调节pH至1.5-3.0，加热至45-65°C，保持30-60min，冷却至常温；加入1/3-1/2体积庚烷，萃取15-30min，静置分相，得庚烷相；加入1倍体积1-5%氯化钠水溶液，洗涤多次，静置分层，得庚烷相；减压浓缩至1/2-1/3体积，减压浓缩温度45-55°C，加入1倍体积纯净水，洗涤多次，继续减压浓缩至1/4-1/6，降温结晶，低温压滤得到利普斯他汀，含量不低于80%。

具体实施方式

本发明由下述实施例进一步说明，但本发明的技术方案并不限于如下实施例。

实施例1

（1）毒三素链霉菌发酵利普司他汀结束后，将15L发酵液转移至50L多功能玻璃罐中，加入稀盐酸调节pH至1.5，加热至45°C，保持30min，冷却至常温。

（2）向玻璃罐中加入1/2体积庚烷，搅拌转速150rpm，萃取30min，静置分相，从底阀排除萃余相，得庚烷相。

（3）加入1倍体积2.5%氯化钠溶液，搅拌洗涤5min，静置分层，排除下层水相，重复多次，直至下层澄清透亮，得上层庚烷相。

（4）将庚烷相减压浓缩至1/3体积，减压浓缩温度50°C，浓缩结束后加入1倍体积纯净水，重复洗涤，直至下层澄清透亮，得上层庚烷相。

（5）将庚烷相继续减压浓缩至原体积1/6，缓慢降温结晶，结晶温度为-12°C，低温压滤得到利普斯他汀熔融晶体，经HPLC测定利普斯他汀含量为81.5%，收率85%。

实施例2

（1）毒三素链霉菌发酵利普司他汀结束后，将15L发酵液转移至50L多功能玻璃罐中，加入稀盐酸调节pH至2.0，加热至65°C，保持30min，冷却至常温。

（2）向玻璃罐中加入1/2体积庚烷，搅拌转速200rpm，萃取30min，静置分相，从底阀排除萃余相，得庚烷相。

（3）加入1倍体积5%氯化钠溶液，搅拌洗涤10min，静置分层，排除下层水相，重复多次，直至下层澄清透亮，得上层庚烷相。

（4）将庚烷相减压浓缩至1/3体积，减压浓缩温度50°C，浓缩结束后加入1倍体积纯净水，重复洗涤，直至下层澄清透亮，得上层庚烷相。

（5）将庚烷相继续减压浓缩至原体积1/4，缓慢降温结晶，结晶温度为-18°C，低温压滤得到利普斯他汀熔融晶体，经HPLC测定利普斯他汀含量为83.3%，收率82.6%。

实施例3