[发明专利]源于桔青霉的penicitrinineA及在制备抗恶性黑色素瘤药物上的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗恶性黑色素瘤药物上的应用。

背景技术

生物碱是一类由生物次级代谢产生的含氮有机化合物，自然界中的生物碱种类较多，大多来源于植物，因此又有植物碱之称。生物碱对人和动物有重要的生理作用，包括平喘镇咳、降血糖、降血脂、抗菌、抗肿瘤、镇痛等，其中以抗菌、抗肿瘤活性最为突出。天然结构生物碱是创新药物研究中发现先导化合物的重要来源，目前应用于临床的生物碱药物已经近百种。研究发现，一些海洋真菌能够在次级代谢过程中产生结构新颖、活性好的生物碱,具有很好的药用和产业化前景。

本发明人研究得知，桔青霉 (Penicillium citrinum) IBPT-5， (已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2013713) 的发酵产物的粗提取物有很好的细胞增殖抑制活性，遂对其活性成分进行研究。研究发现所示生物碱类化合物具有抗人恶性黑色素瘤活性，目前尚未见该化合物对人恶性黑色素瘤细胞A-375的增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于桔青霉的penicitrinine A及在制备抗恶性黑色素瘤药物上的应用。该化合物具有抑制人恶性黑色素瘤细胞增殖作用，具有抗人恶性黑色素瘤活性。其结构式为：

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该化合物的制备方法，是通过发酵培养桔青霉 (Penicillium citrinum) IBPT-5，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物。具体步骤如下：

1发酵生产

培养微生物的常规方法，取桔青霉 (Penicillium citrinum) IBPT-5接种到PDA固体斜面培养基上在28℃培养箱中培养4天，然后接种到培养液中，28℃静止培养30天后，获得菌丝体和发酵液；所述培养液组成：每升水含甘露醇20.0 g、酵母膏3.0 g、麦芽糖20.0 g、味精10.0 g、葡萄糖10.0 g、KH₂PO₄ 0.5 g、MgSO₄ 0.3 g、NaCl 30.0 g；

2 浸膏的获得

用纱布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液用乙酸乙酯1:2 (v/v)萃取两次，萃取液减压蒸馏至干，得到发酵液的乙酸乙酯浸膏32.0 g。

3 化合物的分离精制

该浸膏通过100-200目硅胶拌样后，以石油醚：二氯甲烷：甲醇为洗脱液用减压硅胶色谱柱梯度洗脱，得到11个组分。组分7 (4.2 g) (二氯甲烷：甲醇v/v=100:1的洗脱物) 以二氯甲烷：甲醇为洗脱液，进一步通过加压硅胶柱层析梯度洗脱，得到的亚组分7-6 (二氯甲烷：甲醇v/v=50:1的洗脱物)通过半制备液相色谱(1010型ODS-A，10×250 mm，5 μm)：分离流速为5 mL/min，流动相为75%乙腈含0.1% TFA，得到所示化合物 (97.9 mg，t_R 19.3 min)。

所述桔青霉 (Penicillium citrinum) IBPT-5，已于2013年12月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，地址: 武汉 武汉大学，保藏编号是：CCTCC NO：M 2013713。

所述的化合物在制备抑制人恶性黑色素瘤细胞增殖药物中的用途，及该化合物在制备抗人恶性黑色素瘤药物中的用途。所述肿瘤细胞为人恶性黑色素瘤细胞A-375。

本发明的显著优点：研究所示该生物碱化合物较为罕见，所述生物碱类化合物具有显著的抑制人恶性黑色素瘤细胞增殖活性，目前尚未见该化合物对人恶性黑色素瘤细胞A-375增殖抑制活性的报道，因此市场上也尚未见有与此相关的药物。

附图说明

图1 Penicitrinine A主要的COSY，HMBC和NOESY信号。

具体实施方式

在如下的实施例中所指的化合物的化学结构：

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实施例1该化合物的发酵生产及分离精制

1发酵生产