[发明专利]一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法

权利要求书

1.一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，其特征是：用鲜叶水提液或干叶水提液处理12h，对福寿螺的LC₅₀分别为5.31g/L和3.19g/L；用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；用干叶水提液浸渍10日龄、30日龄和50日龄螺2d，LC₅₀值分别为0.70g/L、2.15g/L和4.20g/L，其中2g/L的红花酢浆草干叶水提液浸渍10日龄和30日龄螺4d的死亡率均为100％；浸渍50日龄5d时，2g/L浓度处理死亡率达到96.65％；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。

2.根据权利要求1所述的一种红花酢浆草鲜叶水提液或干叶水提液杀成年福寿螺的方法，其特征在于：由以下步骤组成：

1.1材料包括：

1.1.1供试植物：

红花酢浆草，全株，采自路旁，用清水洗净后，置烘箱中60℃烘干72h，粉碎后得红花酢浆草原粉，待用；同时采集红花酢浆草新鲜叶片进行试验；

1.1.2福寿螺：

在水稻田中采集螺卵，待其孵化后，置于26℃恒温光照培养箱中，以青饲料饲养待用；使用时分别选取个体大小一致的10日、30日和50日龄福寿螺供试；

1.1.3仪器设备包括：

500mL的烧杯，500mL的加盖一次性塑料碗，小玻璃漏斗，滤纸，量筒，电子分析天平，冰箱，恒温光照培养箱，粉碎机，剪刀，标签；

1.2实验方法

1.2.1植物样品的提取：

红花酢浆草鲜叶水提液、干叶水提液的制备：将红花酢浆草鲜叶剪成1-2cm碎片，用100g鲜叶和1900mL无氯清水配成50g鲜叶/L红花酢浆草鲜叶水提液，浸泡3d后，用纱布过滤，滤液作为母液备用；红花酢浆草干叶水提液母液的配制方法和浓度与鲜叶水提液相同；

1.2.2采卵与孵化：

采卵时间不宜过早，过早卵块太软，不易整体剥离，也不宜过迟，过迟卵块已完全干涸，剥离时易弄破卵粒；一般产卵后10-20小时，卵块未完全变硬时采集较理想；将采集的卵块放在网片或竹筛上，加盖一层纱布，置于室内水盆上方孵化，并注意遮阳避雨；室温28-30℃下进行孵化，随后红色的卵粒开始变淡最后呈现出白色，10-14天后幼螺便破壳而出，落入水中.2天后，幼螺螺顶由红色变为黑色时便开始摄食；培育期间确保水质清新和环境安静；为保持水质清新，应每天更换一次水，每天早晚投喂足量的青饲料；

1.2.3提取物室内杀螺试验：

试验采用浸杀法；参考张楚霜和Vasconcellos的试验方法；

红花酢浆草水提液稀释成2g/L，1g/L和500mg/L；以无氯清水作空白对照；每处理重复3次；在盛有200mL药液的500mL一次性塑料碗中各放入同龄螺20只和少量浮萍食料，10日、30日和50日龄，每只平均体重分别为0.02g、0.10g和0.67g，烧杯用纱布封口以防止其逃逸；分别在处理后6h，12h，1～7d检查各杯内福寿螺的死亡数，计算死亡率；

1.2.4福寿螺死活鉴定标准：

参考Santos方法判断福寿螺的死亡与否：药后6h，12h，1～7d，取出各处理中的怀疑死螺，分别放养在去氯水中观察，开厣爬行者为活螺，余下敲碎螺壳并用解剖针刺其软体，无反应者为死螺；试验期间室内温度为28±2℃；

1.2.5数据分析方法：

试验数据用Excel，DPS数据处理软件进行统计分析；

2、结果分析：

2.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性

由图1-A和图1-B得出，红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10日龄福寿螺幼螺均有较强的毒杀作用；

如图1-A所示，红花酢浆草于叶水提液处理2d后，500mg/L，1g/L，2g/L浓度下的福寿螺死亡率分别为41.65％，68.35％，90％；处理3d后1g/L浓度下的福寿螺死亡率在80％以上，而2g/L浓度处理的福寿螺死亡率接近100％；处理4d后，2g/L浓度下的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也达到85％，6d后1g/L处理的福寿螺全部死亡，500mg/L浓度处理的福寿螺死亡率也达到78.35％；说明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用；

如图1-B所示，红花酢浆草鲜叶水提液在2g/L浓度下处理2d后，福寿螺死亡率在60％以上，但以500mg/L浓度处理，福寿螺的死亡率在30％以下；处理3d后各浓度下的福寿螺死亡率明显增加，1g/L处理的死亡率为53.35％，2g/L浓度处理的死亡率接近100％，处理5d后，2g/L处理的福寿螺全部死亡，1g/L处理的死亡率也有78.35％；7d后，1g/L处理的死亡率接近100％，说明，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱；

由表1得出，红花酢浆草鲜叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC₅₀分别为5.31g/L，2.16g/L，1.12g/L；红花酢浆草干叶水提液对10日龄福寿螺处理12h，24h，2d，LC₅₀分别为3.19g/L，1.58g/L，0.70g/L；分别相当于红花醋浆草鲜叶水提液的14.49g/L，5.89g/L，3.05g/L，计算依据为：100g红花酢浆草鲜叶经60℃烘干72h，得红花酢浆草干叶36165g，故干叶∶鲜叶比为1∶2.73；说明处理12h后红花酢浆草干叶原粉水提液的 毒杀效果明显优于鲜叶水提液，而处理2d后红花酢浆草鲜叶及干叶水提液对福寿螺毒杀效果差异不大；因此，试验进一步用红花酢浆草干叶原粉为材料，评价其水提液对不同日龄福寿螺的毒杀活性；

2.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性：

图2-a、图2-b、图2-c显示，用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50日龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；用2g/L的红花酢浆草干叶水提液处理10日龄4d和30日龄螺5d及50日龄螺6d，其死亡率均为100％；表2是将图2的结果按LC₅₀值进行统计分析的结果；得出红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高；

3.1结论：

3.1.1红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对福寿螺的毒杀活性：

以红花酢浆草鲜叶和干叶为原料，对不同日龄福寿螺进行室内浸杀实验，结果表明红花酢浆草鲜叶、干叶水提液对10曰龄福寿螺幼螺均有较强的杀螺活性；红花酢浆草干叶水提液对福寿螺有明显的毒杀作用，相对于红花酢浆草干叶水提液，红花酢浆草新鲜叶片水提液对10日龄福寿螺的毒杀作用稍弱；

3.1.2红花酢浆草水提液对不同日龄福寿螺的杀螺活性：

以红花酢浆草干叶水提液对10日龄，30日龄，50日龄福寿螺进一步的浸杀实验，结果表明用2g/L，1g/L和500mg/L的红花酢浆草水提液处理10日、30日和50曰龄螺，各同龄螺的死亡率与药物剂量和处理时间均呈明显正相关；将实验数据按LC₅₀值进行统计分析，结果表明红花酢浆草干叶水提液对福寿螺的毒杀活性随螺龄的增加而下降，随处理时间延长而提高。