[发明专利]阿司匹林抵抗相关的P2Y1基因多态性位点及应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学疾病治疗药物选择领域，具体涉及阿司匹林抵抗相关的P2Y1基因多态性位点及应用。

技术背景

随着我国人口老龄化，脑血管病发病率逐年攀升，最新调查结果表明从2010年起脑血管病已成为超越肿瘤危害中国人健康的第一大杀手，每年我国新发病例200万，缺血性脑血管病占70～80％，复发患者占27％，70％的患者留有神经功能缺损，脑血管病的高致死率、致残率和复发率已造成了极大的社会负担和经济负担。抗血小板药物(尤其是阿司匹林)在脑血管病的防治中起着至关重要的作用，但是目前的调查结果表明很多脑血管病患者即使服用了抗血小板药物，仍然反复再发卒中，这种现象称为抗血小板药物抵抗。

抗血小板药物抵抗与诸多因素相关，如脑血管病相关危险因素(性别、糖尿病、吸烟、代谢综合征、急性冠脉综合征、既往心血管事件、肝肾功能异常、血液系统疾病等)，患者依从性或药物剂量，药物相互作用及基因多态性等。其中基因多态性是目前研究热点。既往研究发现，在体内影响阿司匹林作用的多个环节的因子存在基因多态性，这种多态性直接影响其功能，从而使得不同个体服用阿司匹林后对血小板的反应不同。据不完全统计，临床阿司匹林抵抗的患者高达40％，但是因为影响阿司匹林作用的靶点众多，到目前为止，阿司匹林抵抗相关的基因多态性还不确定。但是阿司匹林作为缺血性脑血管疾病二级预防的重要药物，尽快明确阿司匹林抵抗相关基因多态性至关重要。

P2Y1是血小板表面G蛋白偶联受体，ADP通过P2Y1和P2Y12受体刺激血小板的激活和聚集。基于申请人最近的研究，申请人明确了一个与阿司匹林抵抗相关的P2Y1基因多态性位点：P2Y1(A745G)，该位点可用于为缺血性卒中患者选择抗血小板药物，降低阿司匹林抵抗及卒中复发率。

发明内容

本发明的目的在于提供了阿司匹林抵抗相关的P2Y1基因多态性位点：A745G。该位点位于人P2Y1基因全长的第745位，其碱基为A或G，携带有P2Y1突变体745G等位基因的患者与野生型A745患者相比，更易出现阿司匹林抵抗。

本发明的另一个目的在于提供了检测阿司匹林抵抗相关P2Y1基因多态性位点A745G的引物。

本发明最后一个目的在于提供了基于P2Y1基因多态性位点A745G的引物在制备筛选阿司匹林抵抗患者试剂盒中的应用。该试剂盒可用于筛选阿司匹林抵抗患者，以便更好的为缺血性卒中患者选择抗血小板药物，降低阿司匹林抵抗及卒中复发率。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

与阿司匹林抵抗相关的P2Y1基因多态性位点，该位点是在人P2Y1基因的745位发生了A→G的突变，经检测携带有P2Y1突变体745G的患者更容易发生阿司匹林抵抗。基于P2Y1基因的A745G位点设计引物，然后对该位点进行检测。

本发明的保护内容还包括检测阿司匹林抵抗相关P2Y1基因多态性位点A745G的引物，该引物只要是基于P2Y1基因的A745G位点设计的引物，并能成功扩增出包括P2Y1基因的A745G的DNA片段的，均为本发明的保护内容。

优选的，根据上述P2Y1基因多态性位点A745G设计的引物为：

正义链：5‘-CACGGGTGGCCATGTCGC-3’

反义链：5‘-TACCAGGTAAATCGATTT-3’；

或

正义链：5‘-CACATGGGGGAGTTCAGG-3’

反义链：5‘-AACAGTCAGTACAATGAT-3’；

或

正义链：5‘-ACAAAGACTGTACGTAGT-3’；

反义链：5‘-GTCACCTGATACGTGGCA-3’。

基于P2Y1基因多态性位点A745G的引物在制备筛选阿司匹林抵抗患者试剂盒中的应用，包括利用P2Y1(A745G)位点引物对缺血性卒中患者的DNA进行检测，若检测到携带有P2Y1突变体745G的患者，则该患者有更易产生阿司匹林抵抗的趋势，检测方法包括但不限于目前已有的针对SNP位点的检测技术。