[发明专利]一种NAD发酵液的生产方法在审

专利信息
申请号: 201510423670.9 申请日: 2015-07-16
公开(公告)号: CN105018549A 公开(公告)日: 2015-11-04
发明(设计)人: 王康林;杨培周;金永红;杨杨 申请(专利权)人: 合肥平光制药有限公司
主分类号: C12P19/40 分类号: C12P19/40;C12R1/865
代理公司: 合肥市长远专利代理事务所(普通合伙) 34119 代理人: 程笃庆;黄乐瑜
地址: 230000 安徽省合肥市*** 国省代码: 安徽;34
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摘要:
搜索关键词: 一种 nad 发酵 生产 方法
【说明书】:

技术领域

发明涉及发酵技术领域,尤其涉及一种NAD发酵液的生产方法。

背景技术

烟酰胺腺嘌呤二核苷(NAD)是有机体必不可少的多功能小分子,主要作为氧化还原酶的重要辅酶和NADP的来源。NAD(H)参与的多酶氧化还原体系是生物体细胞呼吸链中电子传递过程的主要生物氧化体系,糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分也都是通过这一体系完成的。NAD+、NADP、NADH和NADPH共同作为氢化物的受体和供体,在细胞的能量代谢中起着关键的作用,在医药领域具有巨大应用价值。

目前NAD生产主要通过两种途径:(1)生物催化合成,现代的生物催化技术模拟了生物体内利用酶来完成的反应,这种的模拟条件是严格根据生物体内的代谢特征来进行的,所以条件苛刻、产量低、价格昂贵;(2)酵母直接发酵合成,以葡萄糖、酵母膏、蛋白胨、硫酸铵等配制的培养基经过发酵获得酵母菌,然后经过破壁等工艺分离获得,发酵罐中NAD的产量约为1g/l,NAD含量低也是导致目前NAD市场价格高昂的重要原因。

福寿螺属软体动物,外观与田螺极其相似,个体大、食性广、适应性强、生长繁殖快、产量高。1981年引入中国,目前已被列入中国首批外来入侵物种。在广东、广西等地都有大量分布,严重威胁水稻等农作物的种植,每年为杀死福寿螺所需的农药人工等成本数亿元。食用未充分加热的福寿螺,可能引起广州管圆线虫等寄生虫在人体内感染,可引起头痛、发热、颈部僵硬等症状,严重者可致痴呆,甚至死亡。因此,合理开发,高价值利用福寿螺资源具有重要的经济效益和社会效益。

木薯属于非粮作物,其根茎富含淀粉,是灌木状多年生作物,适应性强,耐旱耐瘠,在旱地农业中起着日益重要的作用,在我国广西、海南以及广东农村种植广泛,产量大,市场价格低,应用成本低。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题,本发明提出了一种NAD发酵液的生产方法,本发明以福寿螺、木薯为原料,廉价易得,成本低,缓解了福寿螺带来的生态问题,保护环境,大大增加了发酵液中NAD的积累量,NAD的积累量达到4.5-6.5g/l,且操作简单,适合工业化生产。

本发明提出的一种NAD发酵液的生产方法,包括如下步骤:

S1、制备福寿螺软组织蛋白溶出物:将福寿螺软组织碎末和枯草杆菌中性蛋白酶溶液混匀,酶解,过滤,取上清液干燥得到福寿螺软组织蛋白溶出物;

S2、制备木薯糖化液:将木薯粉与水混匀,加α-淀粉酶进行液化后,加糖化液进行糖化得到木薯糖化液;

S3、发酵:将福寿螺软组织蛋白溶出物与木薯糖化液混匀得到溶液A,加入维生素复合液混匀得到溶液B,灭菌,冷却至室温,加入发酵菌种,升温至28-32℃,保温36-48h得到NAD发酵液,其中,福寿螺软组织蛋白溶出物与木薯糖化液的重量比为1:30-50,维生素复合液与溶液A的体积比为0.8-1.2:200,发酵菌种与溶液B的体积比为3-5:100。

优选地,S1中,将福寿螺软组织碎末和浓度为4-6wt%的枯草杆菌中性蛋白酶溶液混匀,升温至50-54℃,保温6-7h后,过滤,取上清液,喷雾干燥得到福寿螺软组织蛋白溶出物,其中,福寿螺软组织碎末和枯草杆菌中性蛋白酶溶液的重量比为1:20-30。

优选地,S1中,枯草杆菌中性蛋白酶溶液的溶剂为pH=7.0-7.3的磷酸盐缓冲液,其中,磷酸盐缓冲液含有130-140mmol/l的NaCl、2.4-3mmol/l的KCl、1-2mmol/l的NaH2PO4和7-9mmol/l的Na2HPO4

优选地,S2中,将木薯粉与水混匀,升温至75-80℃,保温30-40min,保温过程中不停搅拌,加α-淀粉酶,保温20-25min,升温至93-95℃,保温70-80min,降温至55-56℃,加糖化液,保温45-50min,调节可溶性糖浓度至10-15wt%得到木薯糖化液。

优选地,S2中,木薯粉与水的重量比为1:4-5,木薯粉与α-淀粉酶的重量比为1:0.003-0.005,木薯粉和糖化液的重量比为1:0.03-0.04。

优选地,S2中,糖化液是糖化酶活性为4000-6000IU/g的溶液。

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