[发明专利]一种L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用在审
| 申请号： | 201510425072.5 | 申请日： | 2015-07-17 |
| 公开（公告）号： | CN105219756A | 公开（公告）日： | 2016-01-06 |
| 发明（设计）人： | 高晓冬;李子杰;吴晓茹;中西秀树 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12P19/02 |
| 代理公司： | 无锡互维知识产权代理有限公司 32236 | 代理人： | 王爱伟 |
| 地址： | 214122 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 李树 磷酸 醛缩酶 催化 合成 稀有 中的 应用 | ||
1.一种L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用。
2.根据权利要求1所述的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶来源于嗜热菌ThermotogamaritimaMSB8，其基因序列表如SP9所示。
3.根据权利要求1或2所述的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在大肠杆菌重组菌中进行表达和纯化。
4.根据权利要求3所述的的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述大肠杆菌重组菌的构建方法为：
将L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶基因片段连接到pET-43.1a载体上，并将该重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中，得到大肠杆菌重组菌。
5.根据权利要求3所述的的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述表达和纯化，包括，
培养大肠杆菌重组菌至OD600＝0.8-1.0，添加终浓度为0.1-1.0mMIPTG，在15-37℃，120～220rpm条件下诱导4～16h；
用含有10-20mM咪唑的缓冲液洗脱杂蛋白，用含有300-500mM咪唑的缓冲液洗脱纯酶。
6.根据权利要求1所述的的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述合成，包括，
向反应体系中加入底物DL-3-磷酸甘油、醛受体、磷酸甘油氧化酶、过氧化氢酶、L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶，在氧气存在的环境下，25-35℃反应12-20h后，调节pH为4.0-5.0，加入酸性磷酸酶，35-39℃反应12-20h。
7.根据权利要求6所述的的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述醛受体为D-甘油醛、L-甘油醛或甘油醛的衍生物。
8.根据权利要求6或7所述的的L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶在催化合成稀有糖中的应用，其特征在于：所述L-鼠李树胶糖-1-磷酸醛缩酶为带标签的融合蛋白或不带标签的蛋白。
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