[发明专利]重组鸡白痢沙门菌、制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种重组鸡白痢沙门菌、制备方法及应用，属于动物细菌基因工程技术领域。重组鸡白痢沙门菌的名称为鸡白痢沙门菌C79‑13ΔcrpΔasd(pYA3493‑HN)，保藏编号：CCTCC NO:M 2015305，其表达的鸡新城疫病毒保护性抗原基因‑HN基因是鸡新城疫病毒重要的免疫原性基因片段，具有良好的免疫保护性。重组菌株衍生于鸡白痢沙门菌标准菌株C79‑13，完全保留了C79‑13针对鸡白痢沙门菌的免疫效力，且其毒力比C79‑13更弱，具有良好的生物安全性，可同时提供针对鸡白痢沙门菌和鸡新城疫两种病原的保护力。同时，该重组菌株不含抗性标记，完全符合疫苗生物安全性要求。

技术领域

本发明涉及一种重组鸡白痢沙门菌，具体涉及一种不含抗性标记的表达鸡新城疫病毒主要保护性抗原的减毒鸡白痢沙门菌，以及该重组鸡白痢沙门菌的制备方法和应用，属于动物细菌基因工程技术领域。

背景技术

沙门菌(Salmonella)是一种胞内寄生的革兰氏阴性肠道杆菌，具有侵袭性。最常见的沙门菌属有鼠伤寒沙门菌、猪霍乱沙门菌、肠炎沙门菌和鸡白痢沙门菌等。沙门菌对人和动物均有较强的致病力，可引起人体和动物的胃肠道疾病，沙门菌在外界环境中的生存力较强，在利用基因工程的方法致弱后，仍具有较强的侵袭力。

最初预防沙门菌的疫苗为全菌体灭活苗，但该类疫苗只能激发机体的体液免疫，且容易引起副作用，此外，还存在需多次免疫及无交叉保护等不足之处，因而不能广泛应用。此后，该领域众多学者模拟沙门菌肠道自然感染的方式，给动物口服减毒沙门菌，结果发现，可诱导机体产生更好的体液免疫和细胞免疫，因此该方法受到众多学者的普遍重视(Li,Q.,Hu,Y.,Xu,Y.,et al..2014.A gene knock-in method used to purify plasmidpSPI12from Salmonella enterica serovar Pullorum and characterization ofIpaJ.J Microbiol Methods,98,128-133.)。

由于肠炎伤寒沙门菌Ty21a及猪霍乱沙门菌疫苗菌株C500的致弱背景不清晰，各国研究者们尝试应用基因工程的方法，研究遗传背景清晰的伤寒减毒基因缺失疫苗株，用于口服免疫研究，例如cya/crp缺失株(Curtiss R,Goldschmidt RM,Fletchall NB,etal.1988.Avirulent Salmonella typhimurium delta cya delta crp oral vaccinestrains expressing a streptococcal colonization and virulence antigen,Vaccine,6(2):155-60.)、asd基因缺失株(Galán J E,Nakayama K,Curtiss IIIR.Cloning and characterization of theΔasd gene of Salmonella typhimurium:usein stable maintenance of recombinant plasmids in Salmonella vaccine strains[J].Gene,1990,94(1):29-35.)等。

减毒沙门菌除本身可作为疫苗外，也可作为载体来表达外源抗原基因。近年来，以减毒沙门菌为载体表达肿瘤、病毒、细菌、寄生虫等的外源保护性抗原基因，研制多联基因工程疫苗已成为该领域的研究热点，为研制新型基因工程疫苗开辟了新的途径(李正,程相朝.减毒沙门氏菌在疫苗和疫苗载体方面的研究进展[J].中国畜牧兽医，2012,01:40-44)。

以减毒沙门菌为载体的基因工程疫苗的优越性主要表现在(胡娇.猪霍乱沙门菌C500Δasd缺失株的构建及其作为疫苗活载体的初步应用[D].扬州大学,2010；Xu,F.,Ulmer,J.B.2003.Attenuated salmonella and Shigella as carriers for DNAvaccines.J Drug Target,11(8-10):481-488.)：