[发明专利]人类ALDH2基因多态性检测特异性引物和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的，涉及一种人类ALDH2基因多态性检测特异性引物和试剂盒。

背景技术

人类乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)是一种催化乙醛以及其他脂肪族醛氧化的四联体蛋白酶。目前,已发现有19种ALDH同工酶，研究较为深入的主要有胞质同工酶ALDH1和线粒体同工酶ALDH2，其中ALDH2在肝脏和胃中具有很高的表达量，是人体乙醇代谢途径中关键酶之一。

人类ALDH2基因位于人类第12号染色体的12q24.2，总长约44kb，含有13个外显子，编码有517个氨基酸残基的多肽，目前发现存在His47Arg、Glu479Lys、Glu504Lys等多种突变体，其中主要突变体是Glu504Lys(rs671)，即位于12号外显子的单碱基突变G1510A。正常的等位基因记为ALDH2*1(*1510G)，突变的等位基因记为ALDH2*2(*1510A)。ALDH2*2在人类各族群中的分布是不同的，研究显示中国人ALDH2*2的频率为16％，日本人24％，泰国人5％，韩国人15％，印度人2％，但在白种人与黑人人群中频率很低，甚至完全缺乏。研究显示，突变型等位基因ALDH2*2的乙醛脱氢酶活性及硝酸酯酶活性基本丧失。

ALDH2*2/*2纯合突变型乙醛脱氢酶活性约为ALDH2*1野生型的2％，ALDH2*1/*2杂合突变型乙醛脱氢酶活性约为ALDH2*1野生型的13-14％。突变型基因ALDH2*2的存在与酒精性中毒、酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)、消化道癌症等疾病有关。研究显示，携带ALDH2*2突变基因型者大量饮酒将显著增加患肝癌的危险性。在饮酒人群中，尤其是重度饮酒者，由于其上消化道长期地与大量酒精直接接触，该区域出现癌变(食道癌、口咽癌等)的几率较高。此外，ALDH2*2显性突变与胃癌的易感性也存在一定的联系。研究显示，ALDH2*2突变人群患肝癌、食道癌、口腔癌的概率分别是ALDH2*1野生人群的3倍、12.95倍、11.72倍以上。

ALDH2同时也是硝酸甘油有效代谢物NO形成的关键，ALDH2*2突变会导致硝酸酯酶活性降低，使得硝酸甘油在体内生物转化过程受阻，有效活性产物NO生成减少，进而导致硝酸甘油治疗心绞痛效果降低。研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，野生型ALDH2对硝酸甘油的催化活性(Vmax/Km)大约是突变型的10倍，且前者迅速起效率也明显高于后者。ALDH2*2/*2纯合突变型硝酸酯酶活性约为ALDH2*1野生型的6-7％，ALDH2*1/*2杂合突变型硝酸酯酶活性约为ALDH2*1野生型的8-15％。同时，ALDH2突变基因携带者服用硝酸甘油无效风险也在大幅增加，ALDH2纯合及杂合突变型使用无效率达到42.4％，大约为ALDH2野生型的3倍。ALDH2基因多态性如表1所示。

表1：ALDH2基因多态性

目前针对基因多态性的检测方法很多，如直接测序法，焦磷酸测序法，高分辨率溶解曲线检测法(High Resolution Melting Analysis，HRM)，荧光定量PCR法等。其中最常见方法为测序法，该方法费用较低，但操作耗时长且灵敏度低；高分辨率溶解曲线法对设备要求比较特殊，临床推广存在一定的困难；传统荧光定量PCR法在临床上应用较为广泛，但该方法检测基因多态性一般采用Genotyping方法进行检测，该方法对样本数量以及多态性分布有一定要求，样本量少时不能对样本基因多态性进行准确检测。因此，需要建立一种快速有效的检测少量样本的ALDH2基因多态性的方法。

发明内容

本发明实施例的目的在于，克服现有技术中的不足，提供一种人类ALDH2基因多态性检测特异性引物和试剂盒，以此解决现有基因多态性检测技术中，样本量少时基因多态性检测效果不理想的问题。

本发明提供了一种人类ALDH2基因多态性检测特异性引物，其中，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明还提供了一种人类ALDH2基因多态性检测试剂盒，所述试剂盒含有本发明所述的特异性引物。

所述试剂盒还包括一组如SEQ ID NO.3与SEQ ID NO.4荧光定量PCR探针序列，且所述荧光定量PCR探针的5’端有FAM或VIC修饰，3’端有NFQ-MGB修饰。