[发明专利]AAD-12事件416、相关的转基因大豆系及其事件特异性鉴定

说明书

本申请是申请日为2010年11月24日、申请号为201080062201.4(PCT申请号为PCT/US2010/058001)、发明名称为“AAD-12事件416、相关的转基因大豆系及其事件特异性鉴定”的发明专利申请的分案申请。

发明背景

aad-12基因(最初来自食酸戴尔福特菌(Delftia acidovorans))编码芳氧基链烷酸酯加双氧酶(aryloxyalkanoate dioxygenase,AAD-12)蛋白。该性状赋予对例如2,4-二氯苯氧基乙酸及对吡啶基氧基乙酸酯(pyridyloxyacetate)除草剂的耐受性。关于植物中的除草剂耐受性的aad-12基因自身在WO 2007/053482中第一次披露。

异源或外来基因在植物中的表达受到外来基因在何处插入染色体中影响。例如，这可以是由于染色质结构(例如，异染色质)或转录调节元件(例如，增强子)接近整合位点的接近性(Weising等,Ann.Rev.Genet 22:421-477,1988)。相同类型的转基因植物(或其它生物体)中的相等基因可以在不同事件间展现出表达水平的广泛变化。还可能存在着空间或时间表达样式的差异。例如，转基因在多个植物组织中的相对表达差异可以不对应于自存在于导入的基因构建体中的转录调节元件预期的样式。

如此，经常创建大量事件，并筛选以鉴定以对于给定的目的满意的水平表达导入的感兴趣基因的事件。对于商业目的，生成成百上千个不同事件，并对那些事件筛选具有期望的转基因表达水平和样式的单一事件是常见的。具有期望的转基因表达水平和/或样式的事件可用于使用常规的育种方法通过有性异型杂交(outcrossing)将转基因基因渗入(outcross)其它遗传背景中。此类杂交的后代维持初始转化体的转基因表达特征。使用此策略来确保充分适应于地方生长条件的许多品种(variety)中的可靠基因表达。

美国专利申请20090130071涉及大豆事件MON87701及检测方法。美国专利申请20090036308和20080051288涉及大豆事件3560.4.3.5及检测方法。美国专利申请20080312082涉及大豆事件DP-305423-1及检测方法。美国专利申请20060282915涉及大豆事件MON89788及检测方法。

先前尚未披露具有本文中所公开的特定事件的AAD-12大豆。

发明概述

本发明涉及具有以保藏号PTA-10442保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的种子的称作DAS-68416-4的AAD-12大豆(Glycine max)事件，及其衍生的后代。本发明的其它方面包括大豆事件DAS-68416-4的后代植物、大豆、种子、和/或植物的可再生部分及种子和后代，以及自其任一种制成的食物或饲料产品。本发明还包括大豆事件DAS-68416-4的植物部分，其包括但不限于花粉、胚珠、花、枝条、根、和叶及营养细胞、花粉细胞、和卵细胞的细胞核。本发明进一步涉及对苯氧基生长素和/或芳氧基链烷酸酯除草剂(无论那些除草剂是否对大豆植物过多(over-the-top)应用，对邻近或附近的土壤、或对邻近或附近的杂草应用)具有耐受性的大豆植物、大豆事件DAS-68416-4的新遗传组成、和包含大豆事件DAS-68416-4的大豆植物的农艺学性能方面。

本发明部分涉及植物育种和除草剂耐受性植物。本发明包括大豆植物中的新的aad-12转化事件，其包含插入大豆细胞基因组内的特定位点中的多核苷酸序列，如本文中所描述的。

在一些实施方案中，所述事件/多核苷酸序列可以与其它性状，包括例如其它除草剂耐受性基因和/或昆虫抑制性蛋白“叠加”。然而，本发明包括具有单一事件的植物，如本文中所描述的。在本发明的一个具体的实施方案中，为了控制各种除草剂抗性杂草(例如，草甘膦抗性杂草)，将一种或多种除草剂耐受性性状与大豆事件DAS-68416-4叠加。

另外，本发明提供了用于检测(例如大豆)样品中的主题事件的存在的测定法。该测定法可以基于插入大豆基因组中的重组构建体的DNA序列及基于在插入位点侧翼的基因组序列。还提供了可用于进行该测定法的试剂盒和条件。

如此，本发明部分涉及整个aad-12插入物及其边界区(在转基因大豆系中)的DNA序列的克隆和分析。这些序列是独特的。基于这些插入和边界序列，生成事件特异性引物。PCR分析表明可以通过分析用这些事件特异性引物组生成的PCR扩增子来鉴定这些事件。如此，可以使用这些和其它相关规程来唯一地鉴定包含本发明的事件的大豆系。