[发明专利]一种用于预示牦牛肌肉嫩度的PCR-SSCP引物对及检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于预示牦牛肌肉嫩度的PCR-SSCP引物对，其特征在于：所述引物对为：

CAST-F：5′- CGTAGTGATGCTTTCTAAGGC-3′；

CAST-R：5′- TACACCCTGCTTTGTCCTCCA-3′。

2.一种用于预示牦牛肌肉嫩度候选基因的PCR-SSCP检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含以下引物对：

CAST-F：5′- CGTAGTGATGCTTTCTAAGGC-3′；

CAST-R：5′- TACACCCTGCTTTGTCCTCCA-3′。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括牦牛CAST*D的DNA标准样，所述CAST*D的DNA标准样的核苷酸序列参见序列表中SEQ ID No.4。

4.权利要求2或3所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：步骤如下：

（1）样品采集和DNA的提取；

（2）待测样本DNA的PCR扩增；所用引物为：

CAST-F：5′- CGTAGTGATGCTTTCTAAGGC-3′，

CAST-R：5′- TACACCCTGCTTTGTCCTCCA-3′；

（3）SSCP电泳：将CAST*D的DNA标准样和待测样本DNA同时进行SSCP电泳，电泳结束后染色判定基因型，携带CAST*D等位基因待测样本的肌肉嫩度高。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时的反应条件为：95℃预变性2min；94℃变性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；最后72℃延伸10min。

6.一种牦牛肌肉嫩度性状的预示方法，其特征在于：步骤如下：

（1）样品采集和样品DNA的提取；

（2）待测样本DNA的PCR扩增；所用引物为：

CAST-F：5′- CGTAGTGATGCTTTCTAAGGC-3′，

CAST-R：5′- TACACCCTGCTTTGTCCTCCA-3′；

（3）SSCP电泳：将CAST*D的DNA标准样和待测样本DNA同时进行SSCP电泳，电泳结束后染色判定基因型，携带CAST*D等位基因待测样本的肌肉嫩度较高。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时的反应条件为：95℃预变性2min；94℃变性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；最后72℃延伸10min。

8.一种牦牛肌肉嫩度性能的分子选种方法，其特征在于：步骤如下：

（1）样品采集和DNA的提取；

（2）待测样本DNA的PCR扩增；所用引物为：

CAST-F：5′- CGTAGTGATGCTTTCTAAGGC-3′，

CAST-R：5′- TACACCCTGCTTTGTCCTCCA-3′；

（3）SSCP电泳：将CAST*D的DNA标准样和待测样本DNA同时进行SSCP电泳，电泳结束后染色判定基因型，选择携带等位基因CAST*D的待测样本，即为肌肉嫩度高的牦牛个体。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增时的反应条件为：95℃预变性2min；94℃变性30s，64℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；最后72℃延伸10min。

10.权利要求1所述的引物对、权利要求2或3所述的试剂盒或CAST*D的DNA标准样在检测和预示牦牛肌肉嫩度性状以及牦牛肌肉嫩度分子选种中的应用。