[发明专利]检测驴奶中是否含有牛奶的引物、探针组合物及试剂盒在审
| 申请号： | 201510431604.6 | 申请日： | 2015-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN104962644A | 公开（公告）日： | 2015-10-07 |
| 发明（设计）人： | 步迅;张全芳;刘艳艳;范阳阳 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院生物技术研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 张祥明 |
| 地址： | 250014 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 驴奶中 是否 含有 牛奶 引物 探针 组合 试剂盒 | ||
1.检测驴奶中是否含有牛奶的引物、探针组合物，其特征在于：包括以下引物和探针，其核苷酸序列如下：
(1)引物
①驴特异引物：
LF：5’-CGTGAAGAGGCGGGAATAACC-3’；
LR：5’-ATTATGTATTTTGACTGGTTAGTCTAG-3’；
②牛奶特异引物：
NF：5’-ACTAACCAACCCAAAGAGAATAAATTT-3’；
NR：5’-GATTTGACTTGTGGGTCTAGTC-3’；
③内参引物：
16SF:5’-ACCGTTACCGAGTCCAGGTG-3’；
16SR:5’-TTCGGACTCGATCAGAGCAC-3’；
(2)探针：
驴奶探针(LP)：5’-CGAGCGACAAAAAATAATATACAAACCTAACCGCTCG-3’；
牛奶探针(NP)：5’-CGTCCAGTAACAACAATCTCCATGAGTTGGTAGTGGACG-3’；
内参探针(16sP)：5’-CGACGGTCCTTTCTAATGTTGCGTCG-3’；
其中，探针的5’端用荧光素修饰：驴奶探针(LP)用FAM标记，牛奶探针(NP)用JOE标记，内参探针(IRCP)用CY5标记；所有探针的3’端的淬灭基团用Dabcyl修饰。
2.一种检测驴奶中是否含有牛奶的试剂盒，其特征在于：包括以下引物和探针，以及PCR反应所必需的反应原料和试剂；
所述引物和探针，其核苷酸序列如下：
(1)引物
①驴特异引物：
LF：5’-CGTGAAGAGGCGGGAATAACC-3’；
LR：5’-ATTATGTATTTTGACTGGTTAGTCTAG-3’；
②牛奶特异引物：
NF：5’-ACTAACCAACCCAAAGAGAATAAATTT-3’；
NR：5’-GATTTGACTTGTGGGTCTAGTC-3’；
③内参引物：
16SF:5’-ACCGTTACCGAGTCCAGGTG-3’；
16SR:5’-TTCGGACTCGATCAGAGCAC-3’；
(2)探针：
驴奶探针(LP)：5’-CGAGCGACAAAAAATAATATACAAACCTAACCGCTCG-3’；
牛奶探针(NP)：5’-CGTCCAGTAACAACAATCTCCATGAGTTGGTAGTGGACG-3’；
内参探针(16sP)：5’-CGACGGTCCTTTCTAATGTTGCGTCG-3’；
其中，探针的5’端用荧光素修饰：驴奶探针(LP)用FAM标记，牛奶探针(NP)用JOE标记，内参探针(IRCP)用CY5标记；所有探针的3’端的淬灭基团用Dabcyl修饰。
3.根据权利要求2所述的检测驴奶中是否含有牛奶的试剂盒，其特征在于：所述PCR反应所必需的反应原料和试剂包括：PCR缓冲液，MgCL2和dNTPs的反应混合物，Taq酶，超纯水 。
4.根据权利要求2或3所述的检测驴奶中是否含有牛奶的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中各组分构成一个20μl的反应体系，pH值为8.3，镁离子终浓度为2.5mM，4种dNTP的终浓度各为250μM，HS-Taq酶的用量为1U/反应，各引物、探针的终浓度均为0.2μM。
5.权利要求1所述的检测驴奶中是否含有牛奶的引物、探针组合物在检测驴奶中是否含有牛奶中的应用。
6.权利要求2～4中任一项所述的检测驴奶中是否含有牛奶的试剂盒在检测驴奶中是否含有牛奶中的应用。
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