[发明专利]一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析测试领域，涉及一种药物杂质的检测方法，具体涉及一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法。

背景技术

盐霉素(Salinomycin)是由白色链霉菌经发酵产生的聚醚类动物专用抗生素，具有防治动物球虫病和促进畜禽生长发育的功能，被广泛地用于国内外的畜牧业中。但是，在盐霉素产品中，如果发酵工艺或菌种发生变化，将会有洋橄榄叶素的伴生，当含量超出一定限度,将对饲养对象产生不良反应,一定程度上会影响盐霉素的使用效果。所以，作为一种对产品有影响的杂质，要求必须对其进行监测。

由于洋橄榄叶素在盐霉素中的含量相对较低(一般小于0.2％)，目前还没用一种相对简便、经济实惠且准确可靠的方法，能够满足对盐霉素中的洋橄榄叶素进行测定。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法，通过供试品与标准品保留时间的对比，同时利用峰面积外标法进行洋橄榄叶素的定性与定量检测。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法，采用如下色谱条件：

色谱柱：(C18，5um)色谱柱；

流动相：以水、磷酸、乙腈、甲醇的体积比360～440:9～11:450～550:81～99为流动相，所述磷酸浓度为2mol/L；

流速：0.8～1.2ml/min

检测波长：240nm～270nm

柱温：35～45℃

优选的，所述流动相中水、磷酸、乙腈、甲醇的体积比为40:1:50:9。

优选的，检测条件中流速为1.00ml/min，检测波长为254nm，柱温为40℃。

检测方法通过以下步骤实现：

(1)洋橄榄叶素标品溶液配制：取洋橄榄叶素标准品用甲醇配制成溶液，过0.22μm滤膜，备供试标品溶液用；

(2)盐霉素样品溶液配制：取盐霉素样品用甲醇配制成溶液，过0.22μm滤膜，备供试样品溶液用；

(3)取相同体积的供试标品和样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照权利要求1-3中任一项所述的条件进行高效液相色谱分析；

用峰面积外标法计算相关物质含量：

式中：A_样为样品中洋橄榄叶素的峰面积；A_标为洋橄榄叶素标准品的峰面积；C_标为标准品溶液浓度。

优选的，将所述洋橄榄叶素标品配制成10μg/ml溶液，盐霉素样品配制成10mg/ml的溶液。

本发明的有益效果在于：1)色谱条件相对简单，不需要梯度洗脱，也不需要衍生反应；样品制备相对简单省事，不需要固相萃取，这样可以节约成本、提高检测效率；2)测试准确度高，样品加标的回收率可达到95％～98％；3)精度高，日内精密度，RSD小于1％；日间精密度，RSD小于2％；4)有很好的线性相关性，在0.2μg/ml～20μg/ml的浓度范围内，相关系数R²可达0.99985；5)灵敏度高，样品检测的定量限可达35ppm(S/N＝10)，检测限可达10ppm(S/N＝2)。可以实现对含洋橄榄叶素大于10ppm的样品直接进行检测，样品不需固相萃取、富集，使样品的处理简单化；6)专属性强，测试过程不受其它成分的干扰，与其它成分的分离度可达2.0以上；对洋橄榄叶素峰进行纯度测定，纯度指数为正；7)耐用性好，色谱条件的微小变化，不影响测试的准确性。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1为洋橄榄叶素标准品测试图谱；

图2为盐霉素样品测试图谱；

图3为空白溶剂测试图谱；

图4为洋橄榄叶素浓度与对应峰面积的线性图；

图5为洋橄榄叶素峰纯度分析曲线图。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。

实施例1检测盐霉素样品

试验仪器和条件:

岛津LC-20系列高效液相色谱仪，SPD-M20A检测器；

色谱柱：Packed Column#3056(C18，5μ)，4×250mm(日本Hitachi公司)，LOT NO.090625-2；

柱温：40℃

流动相：水:2mol/l磷酸:乙腈:甲醇＝400:10:500:90(V:V)

流速：1.00mL/min