[发明专利]一种催化速率提高的角蛋白酶突变体及其制备方法有效
| 申请号： | 201510432168.4 | 申请日： | 2015-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN105002152B | 公开（公告）日： | 2018-04-06 |
| 发明（设计）人： | 张娟;方真;堵国成;陈坚 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/52 | 分类号： | C12N9/52;C12N15/57;C12N15/70;C12N1/21 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙)11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 催化 速率 提高 角蛋白 突变体 及其 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种催化速率提高的角蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体是将来源于嗜麦芽窄食单胞菌的氨基酸序列如 SEQ ID NO.1所示的角蛋白酶KerSMD的C端结构进行剪切，所述剪切是剪切掉第355位之后的C端序列。
2.编码权利要求1所述突变体的基因。
3.表达权利要求1所述突变体的基因工程菌。
4.权利要求1所述突变体在食品、饲料、化工、制革或者制备药物方面的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述应用是指在制备日化洗涤产品、在皮革领域或者在饲料消化中的应用。
6.一种权利要求1所述突变体的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)根据目标突变体的蛋白序列设计引物，PCR扩增或者化学合成法得到含有编码角蛋白酶突变体的核苷酸片段；
(2)将上一步得到的突变体的核苷酸片段连接到质粒pET22b中，得到重组质粒；
(3)将正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组菌，将重组菌发酵培养，得到的发酵上清液即含有角蛋白酶突变体。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵是将重组菌于37℃培养至OD600＝0.6，然后降温至20℃并加入终浓度0.1mM的IPTG进行诱导，培养72h时离心获得上清酶液。
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