[发明专利]检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法

权利要求书

1.一种检测谷物食品中黄曲霉毒素B1的方法，其特征在于，包括：

第一步，将5mL 80体积％的乙腈溶液加入到1.00g核桃粉中，3000rpm振荡5min，以进行混合；

第二步，将第一步得到的混合物于4℃，3000g条件下离心10min，收集上清液，相当于稀释倍数为5，进一步用洗涤缓冲液稀释10倍，制成待检测稀释液，样品的最终稀释倍数为50；

第三步，酶联免疫法检测：

(1)使用前将所有溶液恢复至室温；

(2)取出实验所需数量的稀释孔置于微孔架上，向每个稀释孔加入200μL待检测稀释液，使用前震荡混匀；

(3)取出等量包被抗体的微孔置于另一个微孔架上；

(4)分别向含有待检测稀释液的稀释孔中加入100μL标准品或样品，其中，6个标准品的浓度分别为：0ng/mL、0.02ng/mL、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL，吸打混匀，至少吸打5次；

(5)从每个稀释孔中移取100μL混合液至相应的抗体包被微孔中，20-25℃孵育30分钟；

(6)将微孔中液体倒入废液缸，采用稀释后的洗涤缓冲液洗涤微孔，共洗涤3-5次，然后拍板，去除残留的洗涤液；

(7)向每个包被抗体的微孔中加入100μL黄曲霉毒素B1酶标物，20-25℃下避光孵育30分钟，重复步骤(6)；

(8)移取底物试剂100μL至每个微孔中，20-25℃下避光孵育10分钟；

(9)添加终止液100μL至每个微孔中，使用酶标仪在450nm的波长下读取每个微孔的OD值，务必在加入终止液后5分钟内读取吸光度值；

(10)以标准品对应孔的吸光度值为纵坐标、标准品浓度为横坐标构建标准曲线，拟合方式为spline逻辑拟合，将待检测液稀释液对应孔的吸光度值代入标准曲线中，从标准曲线上读出所对应的浓度，为待检测液稀释液的黄曲霉毒素B1含量，乘以稀释倍数即为谷物食品中黄曲霉毒素B1含量。