[发明专利]体外生物瓣钙化评价的方法及抗钙化因子溶液

权利要求书

1.一种体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)钙化评价液的配制；该钙化评价液包括：戊二醛溶液、生理盐水溶液、硼酸盐缓冲溶液、抗钙化因子溶液和血浆含钙溶液；所述抗钙化因子溶液为醇类、碱溶液、油脂及其衍生物、缓冲溶液组成的混合液；

(2)抗钙化因子溶液预加热：取抗钙化因子溶液于30～40℃的恒温水浴锅中以5～10rpm转速温浴18～24h；

(3)抗钙化前处理：取切割好的瓣膜样品，用戊二醛溶液完全浸泡，室温静置18～24h；

(4)抗钙化因子溶液处理：将抗钙化前处理的液体倒去，倒入硼酸盐缓冲溶液浸没，去液后用抗钙化因子溶液完全浸泡，在30～40℃的恒温水浴锅中以120～130rpm转速温浴67～72h；

(5)瓣膜样品保存：瓣膜样品去液后，倒入生理盐水溶液完全浸泡瓣膜样品，2～8℃保存；

(6)体外钙化反应：取样品放入血浆含钙溶液中，生物瓣与定量的钙离子溶液充分反应，钙离子通过化学键结合到瓣膜中，30～40℃,120rpm，恒温水浴中反应60天内的任意一天；

(7)钙定量检测：分别取任意一天反应后的瓣膜样品进行原子吸收光谱钙含量测定，与标准对照样进行对比，得到评价瓣膜样品的钙含量。

2.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的戊二醛溶液浓度为0.25-5.0％的戊二醛溶液，其每配制5L包括的成分及含量为：硫酸镁1.0～3.0g；氯化钾1.0～3.0g；磷酸氢二钠3.0～5.0g；磷酸二氢钾0.6～1.2g；氯化钠15～30g；25％戊二醛150～250ml；异丙醇500～1000ml；纯水定容到5L。

3.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的生理盐水溶液为0.9％生理盐水，其每配制10L包括的成分及含量为：氯化钠90g±0.1g；纯水定容到10L。

4.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的硼酸盐缓冲溶液配制1L包括的成分及含量为：氯化钠3.0～15.0g；四硼酸钠2.0～5.0g；纯水定容到1L，pH值8.5～9.5。

5.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的抗钙化因子溶液配制1L包括的成分及含量为：试剂A 150～300ml，该试剂A为醇类；试剂B 10～100ml，该试剂B为碱溶液；试剂C 0.5～9.0g，试剂C为油脂及其衍生物；试剂D 690～820ml，pH值8.5～9.5，该试剂D为缓冲溶液。

6.根据权利要求1所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的血浆是人工代血浆，其配制1L的成分包括：10％CaCl2溶液10～15ml；羟乙基淀粉氯化钠注射液900～1000ml。

7.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂A包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种。

8.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂B包括KOH、NaOH中的任意一种。

9.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂C包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种。

10.根据权利要求5所述的体外生物瓣钙化评价方法，其特征在于：所述的试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。

11.一种抗钙化因子溶液，其特征在于：该溶液包括：试剂A、试剂B、试剂C、试剂D，其中：

试剂A为醇类，包括乙醇、异丙醇、戊醇中的任意一种；

试剂B为碱溶液，包括KOH、NaOH中的任意一种；

试剂C油脂类，试剂C包括四烯酸、亚油酸、二十碳三烯酸、亚麻酸、氨基油酸、十二酸、庚酸、软脂酸、硬脂酸、油酸、及其衍生物中的一种或任意几种；

试剂D为缓冲溶液，包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或甘氨酸盐酸缓冲液中的一种，pH值为8.5～9.5。