[发明专利]S100A9重组腺病毒、其构建及应用

权利要求书

1.一种S100A9重组腺病毒，其特征在于，由S100A9重组腺病毒载体质粒和骨架质粒转染HEK293细胞得到重组腺病毒Ad-S100A9；

其中，将S100A9蛋白编码基因重组至pHBAd-MCMV-RFP载体得到所述S100A9重组腺病毒载体质粒，所述S100A9蛋白编码基因的序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述的S100A9重组腺病毒，其特征在于，所述S100A9重组腺病毒载体质粒，由经Not I和Nsi I双酶切的pHBAd-MCMV-RFP载体与S100A9蛋白编码基因连接、转化后构建而成。

3.权利要求1所述的S100A9重组腺病毒，其特征在于，所述S100A9重组腺病毒载体质粒的构建方法，包括如下步骤：

（1）设计引物

S100A9蛋白编码基因的引物如下：

S100A9-NotI-F:ACACGCGGCCGCATGACTTGCAAAATGT；

S100A9-NsiI-R:ACACGATGCATTTAGGGGGTGCCCT；

（2）以含有S100A9蛋白编码基因的RNA逆转录后为模板，用所述引物和DNA聚合酶进行聚合酶链式反应扩增，纯化，得到扩增产物；

（3）pHBAd-MCMV-RFP载体扩增和双酶切

将pHBAd-MCMV-RFP载体用Not I和Nsi I双酶切，酶切完成后，胶回收纯化；

（4）将步骤2）得到的扩增产物和步骤3）经过双酶切的载体进行连接、转化、提取，即可得到重组腺病毒载体质粒pHBAd-MCMV-RFP- S100A9。

4.根据权利要求3所述的S100A9重组腺病毒，其特征在于，步骤4）中的转化包括如下步骤：步骤2）得到的扩增产物和步骤3）经过双酶切的载体进行连接后得到的连接产物中加入感受态细胞，冰上孵育20-30min，40~45℃下水浴60~120sec，于冰上速冷2-3min，加入LB培养基，35~40℃振荡温育，离心，取重悬沉淀，混匀后取适量均匀涂于平板，置于37℃培养箱中倒置培养；在LB培养基中加入氨苄青霉素构成培养基，取平板上培养得到的单克隆接种到所述培养基中，37℃培养箱中，振荡。

5.根据权利要求4所述的S100A9重组腺病毒，其特征在于，所述感受态细胞为DH5α感受态细胞。

6.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，所述骨架质粒为pHBAd-BHG。

7.根据权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，转染HEK293细胞所用的转染试剂为LipofiterTM。

8.权利要求1所述的S100A9重组腺病毒的应用，其特征在于，将所述重组腺病毒Ad-S100A9转入宫颈鳞癌C33A细胞，研究S100A9对宫颈鳞癌细胞生物学行为包括增殖、侵袭和迁移的影响。