[发明专利]一种检测丹参酮IIA的方法及其专用酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测丹参酮IIA的方法及其专用酶联免疫试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

丹参为临床常用中药，具有活血祛瘀，调经止痛，清热安神，凉血消痈等功效。丹参中的丹参酮类化合物表现出多种药理活性，对心脑血管疾病、肝炎、白血病等具有潜在的治疗作用。丹参酮IIA是其主要丹参酮类成分，2010版《中国药典》以丹参酮IIA作为丹参质量控制指标性成分之一。

目前，丹参酮IIA检测方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、液质联用技术、近红外光谱检测等技术，但上述方法均无法同时满足简单快速、高通量、现场检测的需求。酶联免疫吸附检测法具有操作简便、灵敏度高、通量高、检测快速、成本低廉等特点，在中药材的品质鉴定方面应用广泛。丹参市场需求量大，但市售丹参药材质量参差不齐，严重影响丹参药用疗效及其他复方产品开发应用，所以建立一种简便、快速、高通量的丹参酮IIA的检测方法对丹参的质量控制具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供抗丹参酮IIA的单克隆抗体，

本发明提供的抗丹参酮IIA的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.10879的杂交瘤细胞株分泌的。

本发明的第二个目的是提供一株分泌抗丹参酮IIA的单克隆抗体的杂交瘤细胞株DST 2H4。

本发明提供的分泌抗丹参酮IIA的单克隆抗体的杂交瘤细胞株DST 2H4的保藏号为CGMCC No.10879。

本发明保护保藏号为CGMCC No.10879的杂交瘤细胞株DST 2H4，该杂交瘤细胞株的分类命名为小鼠杂交瘤细胞系，该杂交瘤细胞株已于2015年6月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)。

本发明的第三个目的是提供上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株DST 2H4的新用途。

本发明提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株DST 2H4在检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量中的应用。

本发明还提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株DST 2H4在比较或辅助比较待测样品中丹参酮IIA含量高低中的应用。

本发明还提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株DST 2H4在制备检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量的试剂或试剂盒中的应用。

本发明还提供了上述单克隆抗体或上述杂交瘤细胞株DST 2H4在制备检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量的胶体金试纸条中的应用。

本发明的第四个目的是提供一种检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量的酶联免疫试剂盒。

本发明提供的检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量的酶联免疫试剂盒包括独立包装的上述单克隆抗体。

本发明提供的检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量的酶联免疫试剂盒还可含有分别为独立包装的丹参酮IIA标准品和/或用于标记所述单克隆抗体的标记酶；

所述丹参酮IIA标准品可为丹参酮IIA或由所述丹参酮IIA配制成的一系列不同浓度的丹参酮IIA溶液；所述一系列不同浓度的丹参酮IIA溶液的浓度具体可为：40ng/mL、20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL和0.625ng/mL；所述丹参酮IIA溶液的溶剂具体可为PBS缓冲液；所述PBS缓冲液的溶剂为水，溶质为Na₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCl，溶质Na₂HPO₄、KH₂PO₄和NaCl在所述PBS缓冲液中的浓度分别为0.02M、0.0015M和0.14M，pH值为7.5；

所述标记酶具体可为辣根过氧化物酶。

本发明提供的检测或辅助检测待测样品中丹参酮IIA含量的酶联免疫试剂盒还可含有分别为独立包装的包被缓冲液和/或洗涤液和/或底物缓冲液和/或终止缓冲液和/或封闭液；

所述包被缓冲液的溶剂为水，溶质为Na₂CO₃和NaHCO₃；溶质Na₂CO₃和NaHCO₃在所述包被缓冲液中的浓度分别为0.01M和0.04M；所述包被缓冲液的pH值为9.6；