[发明专利]一种从牛血清中分离高纯度牛血清白蛋白的方法有效
| 申请号： | 201510443132.6 | 申请日： | 2015-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN105017412B | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 柏建山;冯少珍;戴金;黄燕琼;邓艳;何淑华;陈增荣;付腾 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国广州机场出入境检验检疫局;中山大学附属第一医院 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K1/20;C07K1/18 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈卫 |
| 地址： | 510470 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 血清 分离 纯度 白蛋白 方法 | ||
1.一种从牛血清中分离高纯度牛血清白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.向牛血清中加入生理盐水或PBS溶液，将牛血清稀释；向稀释后的牛血清中加入适量硫酸铵，2～8℃静置30min以上，离心收集上清液；
S2.向上清液中加入2～3倍体积的PBS溶液，混匀后进行疏水层析，使用PBS溶液洗脱，收集洗脱液；
S3.将洗脱液进行分子筛层析，收集不含盐和其它小分子的蛋白峰；所述层析填料为G10～G75葡聚糖；
S4.使用阴离子交换层析进一步纯化牛血清白蛋白，通过0.1～1.5M浓度氯化钠进行梯度洗脱，收集精纯的牛血清白蛋白；
S5.加入非蛋白质变性类的灭活剂对病原微生物进行灭活，之后进行分子筛层析，使用超纯水洗脱收集牛血清白蛋白；所述分子筛层析填料为G25或G50的葡聚糖；
S6.使用孔径为30K的膜包进行超滤浓缩，使牛血清白蛋白最终浓度达到5mg/ml以上；最后使用0.2微米的滤膜进行过滤除菌；
S1所述硫酸铵按每100毫升稀释血清中加入10～30g硫酸铵的量加入。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1所述生理盐水或PBS溶液的加入量为牛血清体积的1～3倍。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S1所述硫酸铵按每100毫升稀释血清中加入15～25g硫酸铵的量加入。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S1所述硫酸铵按每100毫升稀释血清中加入20～25g硫酸铵的量加入。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2所述疏水层析的填料为苯基-葡聚糖或丁基-葡聚糖。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S4所述阴离子交换层析的填料为DEAE-葡聚糖。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S5所述非蛋白质变性类的灭活剂为β-丙内酯。
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