[发明专利]一株组成型表达基因工程菌及其生产L-丙氨酸的应用

权利要求书

1.一株大肠埃希氏菌（Escherichia coli）基因工程菌Escherichia coli CICC 11032S，其含有外源L-天冬氨酸-β-脱羧酶基因（asd），优选所述asd基因来源于睾丸酮丛毛单胞菌（Comamonas testosteroni）或者其他能够表达相同功能酶的微生物，优选所述asd是以睾丸酮丛毛单胞菌基因组DNA为模板，通过PCR扩增获得，进一步优选所述asd的序列如SEQ ID NO. 1所示。

2.如权利要求1所述基因工程菌，其特征在于所述菌株能够组成型表达所述asd基因，优选所述菌株含有组成型表达L-天冬氨酸-β-脱羧酶基因的表达载体，进一步优选所述表达载体，其特征在于pETPp-asd含有tac和T7共2个启动子，启动子后均含有asd基因，且不含有阻遏基因lacI。

3.权利要求1 - 2任一项所述基因工程菌在生产L-丙氨酸中的用途。

4.如权利要求3所述用途，包括以下步骤：

使用权利要求1 - 2任一项所述的基因工程菌处理富马酸，得L-丙氨酸；

进一步优选包括如下步骤：

(1) 将权利要求1 - 2任一项所述的基因工程菌活化，获得种子液；

(2) 将上述种子液接入发酵培养基，发酵，得发酵液；

(3) 离心上述发酵液，收集菌体，悬浮菌体，转化富马酸，获得L-丙氨酸。

5.如权利要求4所述用途，包括以下步骤：

(1) 将权利要求1 - 2任一项所述的基因工程菌斜面菌种接种种子培养基， 30 – 40^oC，50 – 200 rpm培养8 – 16 h，获得种子液；

(2) 种子液接入发酵培养基，30 – 40^oC，50 – 200 rpm培养10 – 20 h，获得发酵液；

(3) 发酵液离心，收集菌体，生理盐水悬浮，转入pH 7.0 – 9.0，0.8 – 1.2摩尔/升富马酸溶液的转化罐中，至菌体浓度10 – 20（OD₆₀₀），控制温度40 – 50^oC，搅拌转速30 – 80 rpm，转化9 – 12 h，获得L-丙氨酸转化液。