[发明专利]造血干细胞的体外扩增培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程和生物医药领域，特别涉及一种造血干细胞的体外扩增培养方法。

背景技术

目前造血干细胞通常有三个来源:骨髓、外周血及脐带血。与骨髓和外周血造血干细胞相比，脐带血造血干细胞更为原始，自我增殖能力最强，且脐带血具有富含更早期的造血干细胞、采集方便，造血干细胞免疫原性弱、对异源性抗原产生的抗体少、移植过程中不需要严格配型、成熟性T细胞较少、采集和保存容易、无肿瘤细胞污染、对供者无损伤及副作用、CD34+CD38-与CD34+CD33-的比例较高等优点，因而脐带血造血干细胞具有极大的临床应用价值。但是，单份脐血的造血干细胞含量低，在临床中很难用于正常体重成人患者的移植。因此，造血干细胞在移植前需要进行体外扩增。

而造血干细胞的体外扩增需要基质细胞的滋养,有关基质细胞和造血干细胞共培养的研究,目前现有技术中大部分都采用了直接接触共培养的方法。在直接接触共培养中造血干细胞会粘附在基质细胞上或进入滋养细胞层内部,虽然两种细胞呈弱结合,但是实现两种细胞完全分离非常困难,而在临床应用中又必须使用不含基质细胞的纯净造血干细胞,因此,这种直接接触共培养的方法在临床应用中存在着纯化细胞困难或免疫安全性低等安全性问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中造血干细胞与基质细胞直接接触共培养扩增造血干细胞的方式存在纯化造血干细胞困难、免疫安全性低等缺陷，提供一种便于纯化造血干细胞、免疫较安全的造血干细胞的体外扩增方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种造血干细胞的体外扩增培养方法，所述培养方法包括以下步骤：

分别获取造血干细胞和基质细胞；

所述造血干细胞和基质细胞被具有生物相容性的培养件隔开进行共培养；

其中，所述培养件具有若干通孔，所述通孔的孔径小于或等于3.0微米。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述造血干细胞与基质细胞的浓度比为5：1-3：1。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述通孔的孔径大小在0.4-3.0微米范围内。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述培养件呈板状将所述造血干细胞和基质细胞隔开。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述培养件呈开口状且具有一容纳空间，套设在细胞培养容器内。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述培养件底部与培养孔底部的间距为10-450μm。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述培养件底部与细胞培养容器底部的间距为150-350μm。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述培养件由聚碳酸酯材料制成。

在本发明提供的造血干细胞的体外扩增培养方法中，所述造血干细胞为脐带血干细胞，所述基质细胞为脂肪干细胞。

实施本发明提供的造血干细胞体外扩增培养方法，可以达到以下有益效果：通过采用具有生物相容性和通透性的培养件将造血干细胞和基质细胞隔开，并且仅能通过培养件进行物质交流，造血干细胞可通过培养件与基质细胞进行胞质绒毛间接接触，也可以是非接触，不仅解决了现有技术中造血干细胞和基质细胞直接接触共培养难分离的问题，而且也提高了造血干细胞的扩增倍数，并增强造血干细胞的免疫安全性。

附图说明

下面将结合附图及实施例对本发明作进一步说明，附图中：

图1为本发明提供的造血干细胞体外扩增培养方法中，第一种培养容器及培养件的截面示意图；

图2为本发明提供的第二种培养容器及培养件的截面示意图；

图3为本发明提供的第三种培养件的结构示意图；

图4为本发明提供的第四种培养容器及培养件的截面示意图。

具体实施方式

为解决现有技术中造血干细胞与基质细胞直接接触共培养扩增造血干细胞的方式存在纯化干细胞困难、免疫安全性低等缺陷，本发明的创新点在于在造血干细胞和基质细胞共培养体系中，提供一种具有通透性的培养件，用于隔开造血干细胞和基质细胞，防止两者直接接触，使得造血干细胞和基质细胞可通过细胞绒毛接触间接式培养或非接触式培养，而培养液及基质细胞的分泌物可自由穿过培养件为造血干细胞和基质细胞提供营养，从而解决了现有技术中，难以分离造血干细胞和基质细胞的难题，也提高了造血干细胞的免疫安全性。

具体地，本发明提供的一种造血干细胞的体外扩增培养方法，包括以下步骤：