[发明专利]体外诱导巨核系祖细胞的三维细胞培养方法有效
| 申请号： | 201510446748.9 | 申请日： | 2015-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN105002138A | 公开（公告）日： | 2015-10-28 |
| 发明（设计）人： | 裴雪涛;陈琳;谢小燕;刘大庆;岳文;吕洋;李思霆;王思涵;姚海雷;贾雅丽 | 申请（专利权）人： | 军事医学科学院华南干细胞与再生医学研究中心 |
| 主分类号： | C12N5/078 | 分类号： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 李志东 |
| 地址： | 510000 广东省广州市萝*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 体外 诱导 巨核系祖 细胞 三维 细胞培养 方法 | ||
1.一种体外诱导巨核系祖细胞的三维细胞培养方法，其特征在于，将单个核细胞培养于细胞培养袋中，并置于跷跷板式生物反应器上进行培养，其中，所述跷跷板式生物反应器的振荡角度为2-13度，转速为3-40rpm。
2.根据权利要求1所述的三维细胞培养方法，其特征在于，所述振荡角度为5度。
3.根据权利要求1所述的三维细胞培养方法，其特征在于，所述转速随细胞培养时间的延长而增加。
4.根据权利要求3所述的三维细胞培养方法，其特征在于，
在细胞培养的第1-10天，所述转速为10rpm；
在细胞培养的第10天以后，所述转速为14rpm。
5.根据权利要求1所述的三维细胞培养方法，其特征在于，用于培养单个核细胞的培养基为：含SCF、IL-3、IL-6和TPO的stemspan无血清培养基。
6.根据权利要求5所述的三维细胞培养方法，其特征在于，
所述SCF的浓度为20～200ng/mL，优选50ng/mL；
所述IL-3的浓度为5～100ng/mL，优选20ng/mL；
所述IL-6的浓度为10～200ng/mL，优选50ng/mL；
所述TPO的浓度为20～200ng/mL，优选50ng/mL。
7.根据权利要求5或6所述的三维细胞培养方法，其特征在于，所述用于培养单个核细胞的培养基，进一步包含：泊洛沙姆188。
8.根据权利要求7所述的三维细胞培养方法，其特征在于，所述泊洛沙姆188的浓度为0.2～2mg/mL，优选1mg/mL。
9.根据权利要求1所述的三维细胞培养方法，其特征在于，分别于细胞培养的第4天、第7天、第10天，向所述细胞培养袋中补充原培养基的1/3体积的培养基。
10.根据权利要求1所述的三维细胞培养方法，其特征在于，所述跷跷板式生物反应器为跷跷板摇床或WAVE生物反应器。
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