[发明专利]一种pH值稳定的淋巴细胞培养基及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种pH值稳定的培养基。该培养基由1640基础培养基、100mg/L植物血球凝集素(PHA)、体积百分比为20％的小牛血清和5‑50mM甘油磷酸钠/4‑羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)双缓冲系统组成。所述甘油磷酸钠/HEPES双缓冲系统由磷酸缓冲液、甘油磷酸钠、4‑羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)组成，所述磷酸缓冲液含Na₂HPO₄和KH₂PO₄。本发明还提供上述培养基的制备方法和在淋巴细胞培养中的应用。本发明的培养基的pH值不受环境中气体成分的影响，又能够稳定淋巴细胞培养时的pH值；利于培养基的长期保存。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种pH值稳定的淋巴细胞培养基及其制备方法和应用。

背景技术

遗传病是指由遗传物质发生改变而引起的或者是由致病基因所控制的疾病。遗传病涉及的学科很多，包括妇产科学－不孕不育、优生优育、内分泌紊乱；血液病学－慢性粒细胞性白血病，急性粒细胞性白血病，骨髓增生异常综合征，急性淋巴细胞性白血病等；儿科学－出生缺陷；肿瘤学；内科学－放射病、染色体断裂综合征等，具有先天性、终生性和家族性、病种多、发病率高等特点。临床常见的高血压、糖尿病、哮喘、癌症、忧郁症、老年痴呆等与遗传有关。

目前，对于遗传病的诊断主要采用的还是细胞遗传学的方法，即染色体核型分析。染色体核型分析是根据染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体的有无等特征，并借助染色体分带技术对某一生物的染色体进行分析，比较，排序，编号，是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、型态与功能之间的关系所不可缺少的重要手段。染色体核型分析也是临床上广泛开展的对遗传病进行诊断的一种基本方法，经核型分析后，可以根据染色体结构和数目的变异来判断生物的病因，比如是由于缺少了什么样的基因才导致的这种疾病。因此染色体核型分析在遗传病的诊断和筛查上具有重要意义。

染色体核型分析的原理和基本过程：利用PHA(植物血凝素)刺激成熟的淋巴细胞再次分裂；利用秋水仙素在细胞分裂中期破坏纺锤丝，抑制细胞分裂，形成染色体的形态；通过胰酶消化或缓冲液作用，将染色体显带，通过带纹和数目的分析判断染色体数目和结构的情况。从以上原理可以看出，染色体核型分析技术的关键是培养出合格的淋巴细胞。

传统淋巴细胞培养基由基础培养基(RP1640培养基)、抗菌素、小牛血清(或者胎牛血清)、淋巴细胞刺激因子、碳酸氢钠缓冲系统等组成。但是碳酸氢钠缓冲系统容易受环境中二氧化碳的影响，随着保存时间的延长，pH值升高，不利于培养基的保存。

发明内容

本发明的目的在于克服上述技术问题，提供一种pH值稳定的培养基；该培养基的pH值不受环境中气体成分的影响，又能够稳定淋巴细胞培养时的pH值；便于培养基长时间保存。

本发明的目的通过以下方案达到：

本发明的淋巴细胞培养基由1640基础培养基、植物血球凝集素(PHA)、小牛血清和甘油磷酸钠/4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)双缓冲系统组成；所述PHA的浓度为100mg/L，所述甘油磷酸钠/HEPES双缓冲系统的浓度为5-50mM，所述小牛血清的体积百分比为20％。

优选的，所述甘油磷酸钠/HEPES双缓冲系统由磷酸缓冲液、甘油磷酸钠、4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)组成，所述磷酸缓冲液含Na₂HPO₄和KH₂PO₄。

优选的，所述甘油磷酸钠的浓度为3g/L，所述4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)的浓度为3g/L，所述Na₂HPO₄的浓度为2g/L，所述KH₂PO₄的浓度为1g/L。表1为本发明优选的淋巴细胞培养基各组分及浓度列表。

表1