[发明专利]一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法

权利要求书

1.一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，包括植物组织的破碎、MicroRNA的吸附以及杂质的去除，其特征是：

植物组织的破碎：称取0.2-1g植物样品加入液氮研磨成粉状，将其迅速转入1.5ml离心管，加入0.5-1mlTrizol裂解液，振荡器震荡30-60s后，加入100-300ul的BufferA，振荡器震荡30-60s；

MicroRNA的吸附以及杂质的去除：将样品10000-13000rpm/min离心10min，离心后将上清吸到1.5ml离心管，加入等体积的BufferB，混匀后将样品加到RNase-free吸附柱RA，10000-13000rpm/min离心1min，收集液体到新的1.5ml离心管，加入等体积的BufferC混匀后将样品加到RNase-free吸附柱RB；倒掉液体，加入200-600ul去蛋白液，10000-13000rpm/min离心1-5min；倒掉液体，加入200-600ul漂洗液，2000-12000rpm/min离心1-5min；倒掉液体，加入200-600ul漂洗液，10000-13000rpm/min离心1-5min；倒掉液体，吹干后加入30-60ulDEPC水，10000-13000rpm/min离心1-5min，收集液体。

2.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的Trizol提取液为150-200mlsolutionD、PH=4.2-4.5的17-18ml的0.2M氯化钠、170-180ml水饱和酚、34-35ml氯仿、1-2ml2-Mercaptoethaol，其中solutionD的配方如下：280-290g异硫氰酸胍、2-3g月桂酸、PH=7.0-8.0的50-100ml200-500mM柠檬酸钠，加DEPC处理水至500ml。

3.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的BufferA溶液：氯仿。

4.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的BufferB溶液：70-80%乙醇。

5.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的BufferC:无水乙醇。

6.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的去蛋白液溶液：3-8M盐酸胍，10-30mM三羟甲基氨基甲烷，pH6-7，30-40％乙醇。

7.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的漂洗液溶液：10-30mM氯化钠，1-5mM三羟甲基氨基甲烷，pH7-8，70-90％乙醇。

8.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的RNase-free吸附柱RA为硅基质膜吸附柱。

9.根据权利要求1所述的一种利用吸附柱提取植物MicroRNA的方法，其特征是所述的RNase-free吸附柱RB为玻璃纤维滤膜吸附柱。