[发明专利]一种快速检测灰葡萄孢菌对SDHI类杀菌剂抗性的方法及引物组合物

权利要求书

1.用于检测灰葡萄孢菌对SDHI类杀菌剂抗性的LAMP引物组合物：由SEQ ID NO.2所示的正向内引物FIP、SEQ ID NO.3所示的反向内引物BIP、SEQ ID NO.4所示的正向外引物F3、SEQ ID NO.5所示的反向外引物B3、SEQ ID NO.6所示的环引物LF组成。

2.一种检测灰葡萄孢菌对SDHI类杀菌剂抗性的LAMP检测方法，步骤为：

(1)运用权利要求1所述的两对特异性引物对待测样品的基因组DNA进行LAMP恒温扩增，反应体系为10μL，包括240U/mL Bst DNA聚合酶，20 mM Tris-HCl，10 mM KCl，10mM(NH4)₂SO₄，2mM MgSO₄，0.1％Triton X-100，2.0mM MgCl₂，0.6mM dNTPs，0.32M甜菜碱，0.2mM羟基溴酚蓝(HNB)，0.8μM正向内引物FIP，0.8μM反向内引物BIP，0.2μM正向外引物F3，0.2μM反向外引物B3，0.4μM环引物LF，加入无菌超纯水；反应参数为59-61℃ 60min，80℃ 10min；

(2)对上述LAMP扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，在紫外光下检测结果，若存在梯状条带，则证明所检测灰葡萄孢菌为灰葡萄孢菌对SDHI类杀菌剂272位抗性突变型菌株；若无梯状条带，则证明所检测灰葡萄孢菌为非272位抗性突变型菌株；或观察LAMP反应溶液颜色变化，若为天蓝色，判定为灰葡萄孢菌对SDHI类杀菌剂272位抗性突变型菌株，若为紫色，判定为非272位抗性突变型菌株。