[发明专利]LncRNA‑GAS5在制备青光眼诊断试剂中的应用

权利要求书

1.核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的LncRNA-GAS5的特异性扩增引物在制备青光眼诊断试剂中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述青光眼诊断试剂包括 RNA 抽提体系、RNA反转录反应体系和 PCR 反应体系，其中 PCR 反应体系含有特异性扩增如权利要求 1 所述SEQ ID NO:1基因序列的引物序列。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述引物序列为 GAS5 特异性的qRT-PCR的上下游引物。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述 RNA 抽提体系，包括 RNA 抽提试剂；RNA 逆转录反应体系包括反转录酶、反转录体系缓冲液和 RNA 酶抑制剂； PCR 反应体系包括扩增系统和引物系统，所述扩增系统为SYBR Premix Ex TaqTM试剂；所述引物系统包括RNA反转录随机引物和GAS5特异性的qRT-PCR的引物，其中，

RNA反转录随机引物为 GAPDH和/或Beta-tubulin的定量PCR引物序列，

GAPDH定量PCR引物序列，上游引物序列如 SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID

NO:3所示；

GAS5 特异性的 qRT-PCR 的上游引物如 SEQ ID NO:4 所示，下游引物如 SEQ ID NO:5 所示；

Beta-tubulin定量PCR引物序列，上游引物序列如SEQ ID NO:6所示，下游引物序列如SEQ

ID NO:7所示。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述青光眼诊断试剂包括：

（a） 抽提体系

1) Trizol reagent，1管，2000 μL/管；

2) 氯仿，1管，500 μL/管；

3) 无水乙醇, 1管，8000 μL/管；

4) DEPC ddH₂O，1管，1000 μL/管；

5) ddH₂O，1管，2000 μL/管；

6) 异丙醇，8000 μL/管；

（b）反转录体系

1) 总RNA反转录引物，包括Oligo dT和Random 6 mers，1管，浓度：50 μM，50 μL/管；

2）反转录酶，200U/μL，50μL；

3）dNTP Mixture ，10 mM each，50μL；

4）反转录buffer 50μL；

（c）PCR体系

1）SYBR Premix Ex Taq酶；

2）buffer 100μL；

3）GAS5特异性qRT-PCR的上游引物，1管，10 μM，100 μL/管；

GAS5特异性qRT-PCR的下游引物，1管，10 μM，100 μL/管；

GAPDH定量PCR上游引物，1管，10 μM，100μL/管；

GAPDH定量PCR下游引物，1管，10 μM，100 μL/管；

和/或，Beta-tubulin定量PCR上游引物，1管，10μM，100 μL/管；

Beta-tubulin定量PCR下游引物，1管，10 μM，100 μL/管;

4）dNTP Mixture ，10 mM each，50μL。