[发明专利]PGAM2基因启动子区变异位点及其在检测猪肉系水力上的应用

权利要求书

1.PGAM2基因启动子区变异位点在检测猪肉系水力上的应用，其特征在于：该变异位点位于PGAM2基因启动子区的转录起始位点上游360bp处，具有多态性SNP位点，分别为C或T；该变异位点为C的样品系水力低于该变异位点为T的样品系水力，根据PGAM2基因启动子区的转录起始位点上游360bp处的变异位点确定猪肉的系水力情况。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：

1）提取待检测猪肉样品的DNA；

2）选取18个失水率水平较高样品即系水力较低组，平均值±标准误为0.3743±0.0127和18个失水率水平较低样品即系水力较高组，平均值±标准误为0.1133±0.0014分别进行混池；

3）以引物对：PGAM2-1F和PGAM2-1R、PGAM2-2F和PGAM2-2R、PGAM2-3F和PGAM2-3R、PGAM2-4F和PGAM2-4R；对步骤2）获得的DNA混池进行PCR扩增，获得扩增片段；

4）对扩增片段进行测序；

5）分析测序结果，发现位于PGAM2基因转录起始位点上游360bp处的位点，失水率高组C占优势，系水力较低；失水率低组T占优势，系水力较高；选择该位点为T的猪肉样品，系水力较高；

其中，PGAM2-1F序列如：5’- ACCACGCACCTGTTCATT -3’，

PGAM2-1R序列如：5’- GGTAGGAGGCCACTTCTCA -3’；

PGAM2-2F序列如：5’- CCCGTGGCACTGCTCAGA -3’，

PGAM2-2R序列如：5’- GTGCGTGTAGAACCGTGGG -3’；

PGAM2-3F序列如：5′- CACCAGGGAACTCCTTGTTT -3′，

PGAM2-3R序列如：5′- TGTCAGGCAGTCCAAGAGC -3′；

PGAM2-4F序列如：5′- CTCCCTCTGACACCAGGCTAC -3′，

PGAM2-4R序列如：5′- CAAACCAGCCGCAGAAGC -3′。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：步骤3）中PCR扩增反应50 µL体系：2×rTaq混合物 25 µL、上下游引物各2.5µL、待检测DNA2.5 μL、ddH₂O 17.5μL；

PCR反应程序：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s；58-60℃ 30s退火；72 ℃ 30s；34个循环；72℃ 7 min。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：PCR反应程序中，退火温度为：引物对PGAM2-1F和PGAM2-1R 60 ℃；引物对PGAM2-2F和PGAM2-2R 58 ℃；PGAM2-3F和PGAM2-3R 60℃；PGAM2-4F和PGAM2-4R 60 ℃。

5.一种判断猪肉系水力的方法，其特征在于：

1）提取待检测猪肉样品的DNA；

2）以引物对：PGAM2-F和PGAM2-R1、PGAM2-F和PGAM2-R2；对步骤1）获得的DNA进行PCR扩增，获得扩增片段；

3）通过AS-PCR的方法对扩增片段进行分型；

4）根据分型结果，分析猪肉系水力，在PGAM2基因启动子区的转录起始位点上游360bp处的基因型为TT型的系水力高于CT型，CT型系水力高于CC型，选择系水力高的猪肉样品；

其中，PGAM2-F序列如：5′- GGGAAGTCCCAGCGGTATTC -3′，

PGAM2-R1序列如：5′- GCTGGCGTTCCAGCCGCA -3′；

PGAM2-R2序列如：5′-GCTGGCGTTCCAGCCGCG -3′。