[发明专利]一种酶法水解蒙花苷制备金合欢素的方法

权利要求书

1.一种酶法水解蒙花苷制备金合欢素的方法，其特征在于包括制备粗酶液、酶解和纯化步骤，具体为：

(1)粗酶液的制备：将纤维化纤维细菌接种于液体培养基中，30℃培养40h，9000g离心10min后取上清，进行硫酸铵沉淀，收集20％-40％的组分，用缓冲液重新溶解即得；

(2)酶解：以蒙花苷为原料，利用溶解后的粗酶液对其转化，使7位的β-D-葡萄糖苷键被水解得到金合欢素；

(3)金合欢素的制备：待反应结束后，将上述转化液与2倍体积的甲醇混合，加热至60度重复提取3-5次，收集提取液冷却结晶即得到金合欢素。

2.如权利要求1所述的酶法水解蒙花苷制备金合欢素的方法，其特征在于：所述缓冲液为磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、或Tris-HCl缓冲液，助溶剂为HP-β-CD溶液，激活剂为CaCl₂溶液。

3.如权利要求1所述的酶法水解蒙花苷制备金合欢素的方法，其特征在于步骤2)具体方法为：取蒙花苷置于反应瓶中，按照10：1：2：0.1的体积比加入缓冲液、助溶剂、粗酶液与激活剂后共孵育；蒙花苷浓度为0.1-0.5mM，缓冲液为20-50mM，助溶剂的浓度为2-10mM，反应体系中酶量为5-10mg/ml，激活剂浓度为2-20mM，pH值为5.0-11.0，反应温度为20-40℃，反应时间为1-6h。

4.如权利要求1所述的酶法水解蒙花苷制备金合欢素的方法，其特征在于：上述酶处理蒙花苷后，使得二糖苷一步水解转化为苷元，转化率达到98％以上。