[发明专利]一种多荧光通道同步显微成像方法及装置

说明书

本申请要求于2015年07月01日提交中国专利局、申请号为201510376530.0、发明名称为“集成式荧光激发光源装置”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。

技术领域

本发明涉及荧光显微成像技术领域，更为具体的说，涉及一种多荧光通道同步显微成像方法及装置。

背景技术

参考图1所示，为现有的一种荧光显微成像装置，其包括：一单色荧光激发光源1、与单色荧光激发光源1的照射方向呈45度角设置的二色相镜2、物镜3、样品放置台4、发射滤光片5和相机6。其中，单色荧光激发光源1发出激发光，经过二色相镜2反射至物镜3后，照射至样品放置台4的待测样品板上，而待测样品板内颗粒受激发发出荧光，通过二色相镜2和发射滤光片5后，进入相机6成像。

现有的荧光显微成像装置一次只能实现一个荧光通道的检测，当需要多个荧光通道的检测时，只能在一个荧光通道检测完成后，切换至另一个荧光通道进行检测，而后对多个荧光通道的检测结果进行整合。现今很多荧光染料具有快速的淬灭性，在进行多个荧光通道分步检测时，由于样品被反复照射或照射的时间有差异，荧光的淬灭性影响很难测定。因此，若在多荧光通道的检测过程中，能够实现多荧光通道同步检测，即能解决因分步检测而导致的荧光淬灭性的影响。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种多荧光通道同步显微成像方法和装置，实现了多荧光通道同步显微成像，避免了因分步检测而导致的荧光淬灭性的影响，便于实验；而且减少了进入物镜的单色荧光激发光，使得获取的荧光图像更加精确；此外，该装置结构简单且成本低。

为实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种多荧光通道同步显微成像方法，将待测样品板放置完毕后，包括：

根据实验要求在多个单色荧光激发光源中同时点亮多个不同颜色的单色荧光激发光源的组合为目标光源，其中，每个单色荧光激发光源所发出的单色荧光激发光均倾斜射入所述待测样品板的预设检测区域；

在所述待测样品板背离所述目标光源一侧，收集所述预设检测区域内的颗粒受所述目标光源发出的多色荧光激发光的照射而激发的荧光，并将所述预设检测区域放大至预设倍数；

对所述预设检测区域内的颗粒激发的荧光进行多波段滤光处理；

获取所述预设检测区域的荧光图像。

优选的，在点亮所述目标光源后，且在所述目标光源所发出的多色荧光激发光未射入所述待测样品板之前，还包括：

对所述目标光源中每个单色荧光激发光源所发出的单色荧光激发光进行聚光处理。

相应的，本发明还提供了一种多荧光通道同步显微成像装置，包括：

光源装置、样品放置台、物镜、多波段滤光片和图像获取装置；

所述光源装置包括：多个单色荧光激发光源和与所述多个单色荧光激发光源电连接的控制系统，其中，所述多个单色荧光激发光源环绕所述物镜和图像获取装置所构成的成像光路中轴设置，且每个单色荧光激发光源所发出的单色荧光激发光与所述成像光路中轴相交于所述样品放置台的预设位置，所述控制系统根据实验要求在多个单色荧光激发光源中同时点亮多个不同颜色的单色荧光激发光源的组合为目标光源；

所述样品放置台设置于所述多个单色荧光激发光源所发出的单色荧光激发光交汇位置，用于放置待测样品板，且所述待测样品板的预设检测区域设置于所述样品放置台的预设位置；

所述物镜设置于所述样品放置台背离所述光源装置一侧；

所述多波段滤光片设置于所述物镜背离所述样品放置台一侧；

所述图像获取装置设置于所述多波段滤光片背离所述物镜一侧。

优选的，所述光源装置还包括：

明场光源，所述明场光源所发出的全波段白光朝向所述样品放置台、且与所述成像光路中轴重合。

优选的，所述单色荧光激发光源为单色LED荧光激发光源。

优选的，所述光源装置还包括：

设置于所述单色LED荧光激发光源的照射方向上、且设置于所述单色LED荧光激发光源与所述样品放置台之间的激发滤光片。

优选的，所述单色荧光激发光源包括：

白光激发光源；

以及，设置于所述白光激发光源的照射方向上、且设置于所述白光激发光源与所述样品放置台之间的激发滤光片。

优选的，所述光源装置还包括：

设置于所述单色荧光激发光源的照射方向上、且设置于所述单色荧光激发光源与所述样品放置台之间的聚光模组。