[发明专利]乙型肝炎病毒核酸(DNA)快速定量检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒核酸（DNA）定量检测试剂盒（荧光PCR“一管法”），利用针对HBV核酸保守区设计的一对特异性引物、一条特异性荧光探针，配以PCR反应液，在荧光定量PCR仪上，应用实时荧光定量PCR检测技术，通过荧光信号的变化实现乙型肝炎病毒DNA的定量检测，具有操作简便、使用安全、成本低廉的优点。

2.该试剂盒含有核酸释放剂、促释放剂、封闭剂、酶混合液、HBV-PCR反应液、内标、阴性质控品、阳性质控品、定量参考品A～D；核酸释放剂含有KCl、TritonX-100、蛋白酶K、NaOH；促释放剂含有DMSO、BSA；酶混合液含有TaqDNA聚合酶、尿嘧啶-N糖基化酶；HBV-PCR反应液含有HBV保守区域引物探针、内标探针、MgCl₂、脱氧核糖核苷酸。

3.该技术采用微量核酸释放剂(MNRR)，可在一管中进行HBVDNA核酸提取与扩增，取5μl的微量核酸释放剂加入等体积血清或血浆样本，反复吹打混匀10次，置于PCR仪94℃裂解10分钟，然后迅速降至4℃，小心打开管盖加入2.5μl促释放剂并混匀，加入35μlPCR反应液进行荧光定量检测。

4.采用中检所HBV国家参考品中四个浓度梯度的原病毒血清标准品作为荧光定量PCR的标准品A～D，加阴阳性对照与待测样本同步提取、扩增，实现从样本提取到扩增全程监控。