[发明专利]一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法

权利要求书

1.一种提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

1)、将屠宰场卵巢收集的或每头次活体采卵(OPU)获得的卵丘卵母细胞复合体(COCs)置于体外成熟(IVM)液中，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养22-24h；

2)、将冻精解冻后在爬高液内培养30min，取上清液离心5min，然后用体外受精(IVF)液离心洗涤一次，再加入到含卵母细胞的IVF液滴中，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下精卵共同孵育22-24h；

3)、吹打去除经IVF的COCs周围颗粒细胞，而后将受精卵转入胚胎培养液内，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养24h左右，收集分裂胚胎；

4)、将1％琼脂糖凝胶60℃水浴加热溶解，而后放入39℃培养箱备用；用时将溶解后的琼脂糖在塑料培养皿上作4个100μL微滴，置于配备热台(温度调至39℃)的体视显微镜下，转入屠宰场卵巢-IVF分裂胚，清洗2-3次；将巴氏管前端用酒精灯拉细至管口直径略大于受精卵(约为200μm)，吸取琼脂糖清洗过的分裂胚后，待琼脂糖凝固，将琼脂糖小块放入已经含OPU-IVF分裂胚的微滴内；

5)、若微滴内OPU-IVF分裂胚不足10枚，用琼脂糖小块包埋的屠宰场卵巢-IVF分裂胚补足10枚，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养，6-8天后记录囊胚率。

2.如权利要求1所述的提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：在步骤1)中，所述IVM液为：TCMl99+10％FBS+5μg/mLFSH+10μg/mLLH+0.2mM丙酮酸钠+1μg/mLE₂+50μM半胱氨酸+25ng/mLEGF。

3.如权利要求1所述的提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：在步骤2)中，所述爬高液为：改良Tyrode’s液+0.3％BSA。

4.如权利要求1所述的提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：在步骤2)中，所述IVF液为：改良Tyrode’s液+60μg/mL肝素钠+0.3％BSA。

5.如权利要求1所述的提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：在步骤3)中，所述的胚胎培养液为：TCM199+10％FBS。

6.如权利要求1所述的提高水牛活体采卵胚胎生产效率的方法，其特征在于：在步骤4)中，所述的巴氏管前端管口直径为200μm。