[发明专利]抗NSE单克隆抗体产生的杂交瘤

说明书

抗NSE单克隆抗体产生的杂交瘤的制备，属于免疫分析医学领域。本发明提供了一种特异性识别NSE的单克隆抗体，产生该单克隆抗体的杂交瘤，以及使用该单克隆抗体检测NSE的高灵敏度的方法。

【技术领域】

本发明涉及NSE单克隆抗体产生的杂交瘤。

【背景知识】

神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)由α、β和γ三个亚基组成的二聚体，其同工酶可分为αα、ββ、γγ、αβ和αγ五种。α亚基主要存在于肝、肾等组织；β亚基主要存在于骨骼肌和心肌；γ亚基主要存在于神经组织。γγ、αγ组成的同工酶为神经元和神经内分泌细胞特有，故命名为神经元特异性烯醇化酶(NSE)或γ-酶。NSE是一种酸性蛋白酶，等电点为pH 4.7。NSE基因核苷酸序列全长2423bp，可读框从第226到1531个碱基，长度为1305bp，编码434个氨基酸残基，分子量为78kDa。NSE所有抗原决定簇都分布在48～96、188～293、399～433氨基酸序列区，位于其三维结构表面，在免疫反应中可刺激机体产生NSE的单克隆抗体，可用于NSE的检测。NSE是特异性地存在于神经元中，是烯醇化酶基因超家族成员之一，主要参与糖酵解，催化2-磷酸甘油酸变成磷酸烯醇式丙酮酸的关键酶。高浓度存在于神经细胞和神经内分泌细胞以及这些细胞所引发的肿瘤细胞中。肿瘤细胞糖酵解活性异常增高，而又有NSE的异常高表达，尤其在小细胞肺癌和神经母细胞瘤中。NSE在细胞被破坏时从细胞质内释放出来。因此血液循环中的NSE与神经内皮来源细胞的死亡数量相关，这也是NSE能作为相关神经内皮来源肿瘤标志物的原因。NSE在小细胞肺癌临床分期有很好的相关性，疗效监测和判断预后方面也表现出应用价值。

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种抗NSE单克隆抗体以及建立一种简单且具高灵敏度的检测NSE含量的方法，该方法可应用于癌症的检测。以解决现有的单克隆抗体检测NSE的灵敏度不够或价格昂贵，不适合临床大规模的应用的缺点。

本发明获得了能够产生特异性识别NSE的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株9-1与杂交瘤细胞株2-2，此2株细胞株分别在2015年7月17日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C2015103与CCTCC NO：C2015104。此外，经过鉴定，两株单克隆抗体分别识别NSE的两个不同表位，通过9-1与2-2的结合建立了双抗体夹心酶联免疫反应方法，其是一种高灵敏度及高通量的检测系统。

因此，本发明提供了下面所述的1至3的内容：

1.抗NSE的杂交瘤细胞株，其保藏号分别为CCTCC NO：C2015103和CCTCC NO：C2015104。

2.抗NSE的单克隆抗体，分别由保藏号为CCTCC NO：C2015103和CCTCC NO：C2015104的杂交瘤细胞系所分泌，所述单克隆抗体命名为9-1和2-2。

3.如权利要求2所述的抗NSE单克隆抗体的应用，即利用所述的单克隆抗体的双抗体夹心法ELISA检测NSE，夹心法两两配对的抗体来源于保藏号为CCTCC NO：C2015103杂交瘤分泌的抗体9-1和保藏号为CCTCC NO：C2015104杂交瘤分泌的抗体2-2，其步骤包括：

(1)以所述的两两配对的单克隆抗体9-1包被；

(2)加入待测样品孵育；

(3)以所述的两两配对的HRP标记的另一株单克隆抗体2-2作为二抗，加入反应体系；

(4)洗涤后加入酶反应底物，以450nm读取OD值；

(5)结果表明检测的灵敏度很高。

【附图说明】

附图1显示的是本发明中的杂交瘤所产生的抗NSE单克隆抗体在ELISA方法中滴度测量结果。