[发明专利]桑葚红色素提取及纯化的方法

权利要求书

1.桑葚红色素提取及纯化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、桑葚红色素提取工艺

a1、将冷冻新鲜桑葚，自然解冻，研磨，形成料液，用80％的乙醇和0.1％的HCl来配置提取液进行浸提，两者配比为1:1，将提取液加入料液中，常温超声，过滤，得红色液体；

b1、重复上述操作，即依次重复进行浸提、常温超声和过滤，将重复得到的红色液体进行混合；

c1、将红色液体进行旋蒸浓缩，过柱，利用90％的乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩烘干，得到紫红色粉末；

步骤二、纯化工艺中大孔吸附树脂D101用量的确定

a2、称取大孔吸附树脂D101的重量为140g，利用无水乙醇浸泡24h，水洗至液体无白色混浊物；利用5％HCl进行浸泡4h，水洗至pH试纸检测为中性；利用5％NaOH浸泡4h，水洗至pH试纸检测中性，分成20g、30g、40g、50g，分别过柱；

b2、分别取4份15g冷冻新鲜桑葚，按照a1和b1的方法，分别收集滤液，并分别旋蒸浓缩至60mL，过柱上样，按1mL/min流速动态吸附3h，2倍柱体积的去离子水洗脱，用pH2的90％乙醇洗脱，直至洗脱液无色，收集洗脱液，旋蒸浓缩，60℃烘干，分别得红色粉末，各自称重，得出大孔吸附树脂D101量为40g，红色素基本被完全吸附，所得色素量最大；

步骤三、收率确定实验

称取15g冷冻新鲜桑葚，自然解冻，研磨，形成料液，用80％的乙醇和0.1％的HCl来配置提取液进行浸提，按照提取液与料液比为1:15提取液进行浸提，超声30min，超声提取两次制得提取液，大孔吸附树脂D101为40g时，提取液经旋蒸浓缩，60℃烘干，得到84mg色素，收率为5.6mg/g新鲜桑葚。

步骤四、HPLC测定成分确定

以越橘红色素标准品为参考，来鉴定桑葚红色素的结构性质，越橘红色素标准品中主要成分为包括飞燕草岁-3-O-半乳糖苷、矢车菊素-3-0-半乳糖苷、矢车菊素-3-O-葡萄糖苷在内的花色苷类物质，将越橘红色素标准品和桑葚红色素分别进行液相分析和紫外可见光谱，分别得到液相色谱图和紫外可见光谱图，具体操作过程为：

分别取0.1250g的紫红色粉末样品及越橘红色素标准品，分别加25mL的2％盐酸-甲醇溶液，再加95％的甲醇水溶液定容至100mL容量瓶，超声溶解，摇匀，静置3～7min后，用0.22μm微孔滤膜过滤，制成桑葚红色素样品溶液及越橘红色素标准品溶液，进行高效液相色谱分析；

通过比较可得，

液相色谱图中：在t＝3.842min时，单峰为越橘红色素标准品中花色苷中的吸收峰与t＝3.823min时桑葚红色素吸收峰相似；

紫外可见光谱图中桑葚红色素主要成分同越橘红色素成分相似，可判断桑葚红色素内主要成分为花色苷类物质。

2.如权利要求1所述的桑葚红色素提取及纯化的方法，其特征在于，所述步骤一中桑葚红色素超声波吸收光谱的确定：

配制质量浓度为0.05g/dL的桑葚红色素标准液，在400nm～700nm波长下进行扫描，确定最大吸收波长λmax为520nm。

3.如权利要求1所述的桑葚红色素提取及纯化的方法，其特征在于，所述步骤一中最大吸收波长λmax下最佳吸光度的确定：

取四份6g的冷冻新鲜桑葚，研碎，分别按照提取液与料液比为1:10、1:12.5、1:15、1:17.5加入提取液进行浸提，分别常温超声30min，过滤，将各份滤液分别稀释3倍，确定在最大吸收波长λmax下提取液与料液比为1:15时的吸光度最大。

4.如权利要求1所述的桑葚红色素提取及纯化的方法，其特征在于，所述步骤一中最佳超声时间的确定：

取四份6g的冷冻新鲜桑葚，研碎，按照提取液与料液比为1:12.5提取液进行浸提，分别超声15min、30min、45min、60min，过滤，滤液稀释3倍，测定滤液在最大吸收波长λmax下超声30min的吸光度最佳。

5.如权利要求1所述的桑葚红色素提取及纯化的方法，其特征在于，所述步骤一中最佳提取次数的确定：

取四份6g的冷冻新鲜桑葚，研碎，按照提取液与料液比为1:12.5提取液进行浸提，超声30min，过滤，收集滤渣，重新浸提，超声0、1、2、3次，过滤，观察滤渣颜色，确定浸提超声2为最佳。

6.如权利要求1所述的桑葚红色素提取及纯化的方法，其特征在于，所述步骤二中所述过柱参数为：

色谱柱：AgilentZORBAXSB-Aq柱，5μm，4.6×250mm；柱温：30℃；检测波长：525nm；流动相：0.1％甲酸水溶液：甲醇＝60:40(v/v)梯度洗脱；流速：0.8mL/min；进样量：10μL。