[发明专利]一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系及其制备方法

权利要求书

1.一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：首先将疏水性药物山奈酚溶于油基改性Fe₃O₄磁流体，混合均匀后，用注射器滴入牛血清蛋白溶液中，超声、搅拌形成均匀乳液；将该乳液在250～400W超声功率下超声破碎，超声破碎时间10～20min，反应后将产物磁吸洗涤、真空干燥，得到负载山奈酚药物的磁性山奈酚微球；

所述油基改性Fe₃O₄磁流体，磁流体介质为环己烷，Fe₃O₄磁流体的质量分数为20％；所述牛血清蛋白溶液的质量分数为2％；

所述的疏水性药物山奈酚与油基改性Fe₃O₄磁流体的质量比为1：400；

步骤2：通过氨羧反应连接自制的氨基化石墨烯量子点，得到具有荧光磁性双功能的山奈酚微球，具体过程如下：

A、氨基化石墨烯量子点采用水热法合成，利用有机化合物芘在热浓硝酸条件下的硝化作用，稀释过滤除酸后，得到黄色的1,3,6-三硝基芘，再利用配制的水合肼和氨水修饰改性；通过超声处理和高压反应釜加热合成水溶性GQDs的产物；过滤，在真空条件下加热至30～50℃干燥，得到绿色的氨基化石墨烯量子点GQDs；

B、将磁性山奈酚微球、羟基琥珀酰亚胺NHS加入H₂O中，磁性山奈酚微球的质量浓度为0.4～0.6mg/mL、羟基琥珀酰亚胺NHS与磁性山奈酚微球的质量比为86：75，在20～30℃的温度下反应0.5～1h，；

加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳二亚胺盐酸盐EDC，于20～30℃下振荡反应1～3h，EDC与磁性山奈酚微球的质量比为4：3；

在上述反应后的溶液中加入浓度为0.01～0.5mol/L氨基化石墨烯量子点GQDs-NH₂水溶液，氨基化石墨烯量子点与磁性山奈酚微球的质量比为2：5；加入浓度为0.2～0.4mg/mL氨基化石墨烯量子点GQDs-NH₂水溶液后的反应，于20～30℃的反应温度下振荡反应6～18h；反应后将产物磁吸分离、去离子水洗涤、在30～50℃下干燥，得到荧光标记的磁性山奈酚微球；

步骤3：将磁性荧光双功能的山奈酚微球与人体Hela细胞共培育，用MTT法检测细胞毒性。

2.根据权利要求1所述的一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系的制备方法，其特征在于：所述步骤1中，所述的超声功率为300W。

3.根据利要求2所述的一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系的制备方法，其特征权在于：所述步骤1中，所述的超声破碎时间为15min。

4.根据利要求1所述的一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系的制备方法，其特征权在于：所述步骤2、B中，所述的羟基琥珀酰亚胺NHS与磁性山奈酚微球反应温度为25℃。

5.根据利要求1所述的一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系的制备方法，其特征权在于：所述步骤2、B中，加入氨基化石墨烯量子点GQDs-NH₂水溶液后的反应，振荡反应时间12h。

6.一种按照权利要求1-5所述的一种荧光标记的磁性山奈酚微球体系的制备方法所制备的荧光标记磁性山奈酚微球体系，粒径50～120nm。