[发明专利]一种卷曲链霉菌发酵生产卷曲霉素的培养基和培养方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种卷曲链霉菌发酵生产卷曲霉素的培养基和培养方法。

背景技术

卷曲霉素是由卷曲链霉菌发酵产生的环状多肽类抗生素，由4个结构相似的活性化合物——IA，IB，IIA和IIB组成，其中IA和IB的含量占80％～90％，是发挥疗效的主成分。卷曲霉素对耐多药及持留期结核分枝杆菌具有独特的疗效，被临床上确定为二线结核病治疗药物。

目前，国内卷曲霉素的发酵生产采用三级发酵模式，该方式存在的主要问题有以下几点：

1卷曲霉素发酵水平较低，其发酵水平维持在9000u/ml左右。

2常规培养基的速效碳源是葡萄糖，灭菌过程中易产生“美拉德反应”，即产生抑制菌体的有毒物质。

3卷曲霉素培养基中加入动物蛋白胨，增加了提取和纯化的难度。

4卷曲霉素补料工艺中加入部分前体物质，如甘氨酸、丝氨酸赖氨酸等，发酵液容易变色，增加了提取纯化的难度。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种发酵工艺简单，有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现卷曲霉素稳定、高效生产的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产卷曲霉素的培养方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种卷曲链霉菌发酵生产卷曲霉素的培养基，其特征在于包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其中

所述一级种子培养基的组成为：

豆油2～6ml/L、小麦麸皮12～16g/L、麦芽糖8～12g/L、麦芽糖酶0.002～0.006g/L、鱼粉9～13g/L、玉米浆12～16ml/L、一浸豆粕粉7～11g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述二级种子培养基的组成为：

豆油3～7ml/L、小麦麸皮15～19g/L、麦芽糖10～14g/L、麦芽糖酶0.003～0.007g/L、鱼粉12～16g/L、蚕蛹粉4～9g/L、一浸豆粕粉7～11g/L、玉米蛋白粉10～14g/L、硫酸铵0.2～0.6g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；

所述发酵培养基的组成为：

豆油6～10ml/L、小麦麸皮21～25g/L、麦芽糖26～30g/L、麦芽糖酶0.005～0.009g/L、鱼粉16～20g/L、蚕蛹粉10～14g/L、一浸豆粕粉14～18g/L、玉米蛋白粉13～17g/L、硫酸铵0.5～0.9g/L、轻质碳酸钙3～7g/L、磷酸二氢钾0.1～0.5g/L、氯化钠0.002～0.006g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸亚铁0.1～0.5g/L、氯化锰0.003～0.007g/L，氧载体0.1～0.5g/L、聚醚改性硅油0.3～0.7ml/L。

所述氧载体是正己烷或全氟化碳。

一种利用上述培养基生产卷曲霉素的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：

1)一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌并冷却至15～20℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的卷曲链霉菌母瓶发酵液按照0.1～0.2L/m³的接种量接入一级种子培养基中进行种子培养，至菌体浓度20～30％、pH值6～7、培养时间30～50h移种；

2)二级种子培养：首先将二级种子培养基灭菌并冷却至15～20℃，并用无菌空气保压，将已经培养好的一级种子培养基移入二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度30～40％、pH值6～7、培养时间40～50h时移入发酵培养基；

3)发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至15～20℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的二级种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度35～45％、总糖＜8mg/100ml、氨基氮5～10mg/100ml、化学效价＞11500u/L、卷曲霉素ⅠA+卷曲霉素ⅠB含量＞85％；pH5～7、培养时间140～150h时终止发酵。

所述一级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮30～40mg/100ml、溶磷20～30ug/ml、总糖10～20mg/100ml、pH6～7。

所述二级种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮35～45mg/100ml、溶磷30～40ug/ml、总糖20～30mg/100ml、pH6～7。