[发明专利]一种利用高速逆流色谱法从马蔺子中分离制备低聚芪类化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用高速逆流色谱法从马蔺子中分离制备低聚芪类化合物的方法。

背景技术

马蔺(Iris lactea Pall.var.chinensis(Fisch.)Koidz.)，亦称马莲、马兰、蓝紫草、兰花草等，是鸢尾科(Iridaceae)鸢尾属(Iris L.)多年生草本宿根植物。马蔺自然分布于我国东北、华北、西北等地，以草原区分布较为普遍。马蔺子味甘，性平，凉血止血，清热利湿。近代民间有用作口服避孕药和治疗功能性子宫出血、黄疸型肝炎及宫颈癌等疾病。目前，从鸢尾属中分离得到了多种化合物，主要包括黄酮类化合物及其糖苷、异黄酮类化合物及其糖苷、苯醌类化合物、三萜类化合物及其皂苷、芪类化合物。

低聚芪类化合物具有广泛的药理作用，如抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、神经保护等作用。为有效开发利用马蔺子资源，以及进一步研究低聚芪类化合物的药理活性及作用机制，开发从马蔺子中快速制备高纯度低聚芪类化合物的方法具有重要的意义。而对低聚芪类化合物的分离多采用传统柱色谱分离，由于传统柱色谱具有分离周期长、消耗大量有机溶剂、对样品的死吸附严重等不足。因此，有必要探索一些高效的方法来制备高纯度的低聚芪类化合物。

高速逆流色谱(High-speed counter-current chromatography，简称HSCCC)分离技术是一种连续高效的液-液分配色谱分离技术，它不用任何固态的支撑物或载体，利用两相溶剂体系在高速旋转的螺旋管内建立起一种特殊的单向性流体动力学平衡，其中一相作为固定相，另一相作为流动相，在连续洗脱的过程中能保留大量的固定相，物质的分离依据其在两相中分配系数的不同而实现，特别适合于天然产物活性成分的分离。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用HSCCC技术从马蔺子中提取分离四种低聚芪类化合物的方法。

具体地，本发明提供了一种利用高速逆流色谱法从马蔺子中分离制备低聚芪类化合物的方法，它包括如下操作步骤：

(1)粗提物的制备：

将马蔺子粉碎后，用50-90％v/v乙醇提取，提取液减压浓缩回收溶剂后得到乙醇粗提物，即待分离样品；

(2)采用高速逆流色谱法分离vitisin A、流分II和ε-viniferin(ε-葡萄素)：

取正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为2～6∶4～7∶2～6∶3～7，置于分液漏斗中配制两相溶剂系统，取上相为固定相，下相为流动相；将固定相充满逆流色谱的色谱柱，在25～35℃下，主机正转，转速为800～900r/min，然后以1.5～10ml/min的流速泵入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态；步骤(1)制备的粗提物，以流动相为溶剂溶解，制备样品溶液；将样品溶液进样，在紫外检测器下分别接收各目标成分，浓缩、干燥，即可分别得到vitisin A、流分II和ε-viniferin；

(3)采用高速逆流色谱法分离vitisin B和vitisin C：

取石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为2～7∶2～7∶2～7∶2～7，置于分液漏斗中配制两相溶剂系统，取下相为固定相，上相为流动相；将固定相充满逆流色谱的色谱柱，在25-35℃下，主机正转，转速为800～900r/min，然后以1.5～10ml/min的流速泵入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态；取流分II，以流动相为溶剂溶解，制备样品溶液；将样品溶液进样，在紫外检测器下分别接收各目标成分，浓缩、干燥，即可分别得到vitisin B和vitisin C；

其中，步骤(2)、(3)中的紫外检测波长为325nm。

进一步地，步骤(1)中，乙醇浓度为75～90％v/v，优选为80～90％v/v，更优选为85％v/v。

进一步地，步骤(1)中，乙醇提取次数为1～5次，优选为3次。

进一步地，步骤(2)中，石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为2.5～3∶6～6.5∶4～4.5∶5～5.5。

进一步地，步骤(2)中，vitisin A、流分II和ε-viniferin的出峰时间依次为40～130min、75～175min、90～205min。

本发明一个具体实施方式中，正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为3∶6.5∶4.2∶5.5，vitisin A、流分II和ε-viniferin各成分的出峰时间依次为60～80min、115～135min、140～155min。