[发明专利]一种人乳铁蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地，涉及一种人乳铁蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

“硕鼠”的问世(Palmiter et al.,1982)，加速了转基因生物的研究。克隆绵羊“多莉”的诞生(Wilmut et al.,1997)，促进了转基因技术在哺乳动物方面的广泛应用。目前研制成功多种用于生产药用或食用蛋白、提高瘦肉率、改善营养、增强抗病力的转基因猪、牛、羊(Schnieke et al.,1997；Toledo et al.,2006)，其潜在的经济效益和社会效益巨大，具有良好的商品化前景。但是由于转基因生物及其产品存在风险，转基因生物及产品的管理一直受到各国政府的高度重视。

为了保护人类自身的健康和生存环境，包括我国在内的许多国家相继制定了转基因生物安全法规，对转基因生物及产品采用标识制度，对转基因食品进出境进行严格管理。要使这些法规、制度得以顺利实施，需要有效的检测技术做支撑。目前转基因生物及其加工食品的检测方法主要包括基因水平的检测和蛋白水平的检测，在蛋白检测方面，目前人乳铁蛋白的检测方法以ELISA检测法为主，但是现有的抗人乳铁蛋白的抗体因敏感性和特异性较低，无法满足双抗夹心酶联免疫检测人乳铁蛋白的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种敏感性和特异性更高的双抗夹心酶联免疫检测人乳铁蛋白的技术方案。

为了实现上述目的，本发明提供了一种人乳铁蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒，其中，该试剂盒包括：酶联板、包被缓冲液、第一单克隆抗体、封闭液、酶标记的第二单克隆抗体、显色底物和终止液；所述第一单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.10594的杂交瘤细胞株分泌得到，所述第二单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.10595的杂交瘤细胞株分泌得到。

通过上述技术方案，本发明能够通过双抗夹心酶联免疫检测方法，对人乳铁蛋白的检测取得1ng/mL的灵敏度，对牛乳铁蛋白和羊乳铁蛋白不呈现交叉反应，并且对人溶菌酶转基因牛、人α-乳清白蛋白转基因牛不呈现交叉反应，具有较高的敏感度和特异性。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

生物材料保藏

本发明的一株杂交瘤细胞株是本发明的发明人自行融合筛选得到的，其保藏编号为CGMCC NO.10594，保藏日期为2015年5月8日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为杂交瘤细胞株。

本发明的另一株杂交瘤细胞株是本发明的发明人自行融合筛选得到的，其保藏编号为CGMCC NO.10595，保藏日期为2015年5月8日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为杂交瘤细胞株。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供了一种人乳铁蛋白双抗夹心酶联免疫检测试剂盒，其中，该试剂盒包括：酶联板、包被缓冲液、第一单克隆抗体、封闭液、酶标记的第二单克隆抗体、显色底物和终止液；所述第一单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.10594的杂交瘤细胞株分泌得到，所述第二单克隆抗体由保藏编号为CGMCC NO.10595的杂交瘤细胞株分泌得到。

其中，为了提高定量检测的准确性并提高试剂盒的易用性，优选地，该试剂盒还含有人乳铁蛋白标准品。其中，所述人乳铁蛋白标准品可以为从人乳纯化出来的人乳铁蛋白，也可以是转人乳铁蛋白基因的牛乳中纯化出来的重组人乳铁蛋白，还可以是转人乳铁蛋白基因的大米中纯化出来的重组人乳铁蛋白。

其中，所述包被缓冲液可以为常规的ELISA包被缓冲液，例如为含有0.05-0.1体积％吐温-20的磷酸盐缓冲液。

其中，所述封闭液可以为常规的ELISA封闭液，例如为含有0.05-0.1体积％吐温-20和5-10重量％酪蛋白的磷酸盐缓冲液。