[发明专利]一种多粘类芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于植物病害生物防治技术领域，特别是涉及一种多粘类芽孢杆菌及其应用。

背景技术

水稻纹枯病，即Rice sheath blight,简称RSB，是由立枯丝核菌，即Rhizoctonia solani，侵染引起，与稻瘟病、白叶枯病并称水稻“三大病害”。由于该病发生面积广、流行频率高，其所导致的产量损失往往超过稻瘟病，成为水稻稳产高产的严重障碍。1934年植物病理学家魏景超在中国首次发现这种病害。1975年水稻纹枯病被列入全国防治对象成为水稻三大病害之一。1995年在荷兰召开了第二届水稻纹枯病会议重点讨论了纹枯病病原菌的病理学、分类学、生态学和病害的控制，这说明水稻纹枯病己引起人们足够的重视。20世纪50年代前的一段时期此病曾一度被称为“东方病害”，目前该病己在亚、非、欧、美各洲水稻种植国家普遍发生，以东南亚稻区受害最重。

近年来，随着矮秆品种和杂交水稻的大面积推广及旱直播栽培技术的变革，水稻纹枯病发生面积逐年上升趋势，现已成为我国华南以及长江中下游水稻产区的重要病害。该病害是一种高温高湿型病害，在水稻整个生育期均可发生，以分孽期和抽穗期危害最重。发病部位主要在叶鞘和叶片，严重时可伸入茎秆向上扩展至穗部，最典型的症状是云纹状病斑和菌核。植株发病后叶片枯死，结实率下降，一般减产10％-30％，严重时达到80％，甚至绝收。

由于纹枯病菌腐生能力强、寄主范围广，至今国内外尚未发现对该病的高抗品种。该病原菌对化学药剂的抗性逐年增强，药剂用量不断提高。因防治纹枯病而长期大量使用农药造成自然生态环境污染及稻米农药残留量增加的问题也越来越突出。例如，该病菌对国内的主要防治药剂——井冈霉素已产生明显的抗药性，每季用药次数已从20年前2次增加到现在的3-5次，用药量也从1.5kg/hm²增加到4.5-6.0kg/hm²。水稻纹枯病是一种土传病害，其病原菌对寄主的寄生专化性不强，利用有益微生物进行生物防治既经济有效又无副作用。因此，寻找防治水稻纹枯病的拮抗微生物具有重要意义。

利用生防菌株防治植物病害在国内外均有报道，至今美国已有4种芽孢杆菌制备的生防菌剂获得了生产许可证；经检索，申请者在现有的专利和非专利文献中检索到一些关于多粘类芽孢杆菌的文献报道和专利。例如，专利申请号为2012103480675公开了“一株根际拮抗细菌多粘类芽孢杆菌YC0136及其应用”，利用多粘类芽孢杆菌YC0136防治烟草黑胫病、促进烟草生长。专利申请号为2013106601996公开了“一株防治十字花科根肿病的多粘芽孢杆菌N3-4及其应用”，利用多粘类芽孢杆菌N3-4制备水剂或可湿性粉剂，用于防治十字花科根肿病。专利申请号为2013105906361公开了“一种多粘类芽孢杆菌和井冈霉素复配组合物防治油茶炭疽病的用途”，利用多粘类芽孢杆菌和井冈霉素复配组合物防治油茶炭疽病。但目前并没有对水稻纹枯病菌有抑制效果的多粘类芽孢杆菌的报道。

发明内容

为改进现有防治技术的不足，本发明的目的在于提供一种多粘类芽孢杆菌及其应用，该甲基营养型芽孢杆菌对水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病菌、核桃根腐病菌等多种病原菌具有显著的拮抗作用。

本发明第一方面提供了一种多粘类芽孢杆菌，其于2015年5月15日保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015298，命名为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)WK-3。

多粘类芽孢杆菌WK-3的菌学特性：

a、形态特征：WK-3为革兰氏阳性菌，呈杆状，芽孢椭圆，在LB平板上形成的菌落成圆形，边齐，隆起，湿润，有光泽，半透明，乳白色。

b、生理生化特征：水解淀粉，周生鞭毛，氧化酶阴性，接触酶阳性。

多粘类芽孢杆菌WK-3的16S rDNA序列如序列表SEQ ID No.1所示，与Genbank上已报道序列进行比对，最终确定菌株WK-3为多粘类芽孢杆菌。

本发明第二方面提供了多粘类芽孢杆菌WK-3在抑制水稻纹枯病菌、西瓜枯萎病菌、核桃根腐病菌中的应用。

本发明第三方面提供了多粘类芽孢杆菌WK-3的筛选方法，具体步骤包括：

(1)将水稻植株的茎秆培养后用无菌水配制为悬浮液，涂平板后培养，选取单菌落；

(2)用平板对峙法从步骤(1)选取的单菌落中筛选出对水稻纹枯病菌有抑菌作用的菌株。