[发明专利]肌钙蛋白I快速定量测定免疫层析试纸卡

说明书

技术领域

本发明涉及一种心肌肌钙蛋白I快速定量检测试纸卡，属于医学领域。

背景技术

心肌肌钙蛋白I(cTnI)是心肌损伤敏感及特异性最强的标志物之一，在急性心肌损伤及心肌炎中作为判断心肌细胞损伤的金标准，也作为冠动脉综合征危险分层及预后的关键生化标志物。肌钙蛋白属于调节蛋白，分子呈球形，由肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)、肌钙蛋白C(TnC)三条肽段组成，其中肌钙蛋白I(cTnI)属于一种碱性蛋白，共210个氨基酸，在血清中游离形式只占4.1％，大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合在一起，以复合体形式存在，此外还有可能以氧化型、还原型、磷酸化、去磷酸化及蛋白降解形式释放，属于心肌损伤高敏感指标性物质，在“微型心肌损伤”中肌钙蛋白I即可出现阳性结果，因此是临床上作为心肌细胞损伤的标志性检测项目之一。

目前，临床上提供的便捷快速的检测方法主要是胶体金免疫层析试纸，其缺点是无法进行精确定量检测，且抗干扰性差。本发明为解决上述问题，采用上转发光和免疫层析相结合的方法，提供一种同时具有胶体金试纸的快速便捷，精确定量的优点的检测试纸。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速检测心肌肌钙蛋白I的上转发光免疫层析试纸卡(UPT试纸卡)。该试纸卡可快速定量检测心肌肌钙蛋白I的含量，适用于上转发光(UPT)免疫分析仪；具有简单快捷，准确度高，特异性好等特点。

本发明的技术方案

1.一种肌钙蛋白I快速定量测定免疫层析试纸卡，其特征在于该检测试纸卡由粘性底衬，样品垫，结合垫，分析膜，吸水垫，终点指示贴，该卡包装在塑料盒式存储器中，其中：

样品垫为浸有20mM，pH＝7.5的PBS，0.1％吐温-20，1％BSA的样品处理液干燥后的滤纸；

结合垫为喷涂有cTnI的氨基端段抗体标记得到免疫UCP复合微球低温干燥品；

分析膜为分别用抗体包被缓冲液和质控包被缓冲液在硝酸纤维素膜上均匀涂布一条宽约1至1.5mm的检测带(T)和质控带(C)，且检测带与质控带间隔距离为4至5mm，经低温干燥；

吸水垫为滤纸；

终点指示贴为浸有含溴百里蓝的滤纸。

2.如权利要求1所述的一种肌钙蛋白I快速定量测定免疫层析试纸卡，其特征在于各试剂组分的位置是分别将样品垫，结合垫，分析膜，吸水垫和终止指示贴依次贴与粘性底衬上；吸水垫与分析膜一段齐平且重度重叠，结合垫与分析膜另一段齐平且重度重叠，样品垫与结合垫一段齐平并轻度重叠，反应终止指示带贴于吸水垫上。

3.如权利要求1所述的肌钙蛋白I快速定量测定免疫层析试纸卡的应用，其特征在于：

(1)取待测样本滴加至试纸的样本窗口，静置5min。

(2)当终止指示窗口的指示贴变蓝时，说明反应完全，即可将试纸用上转发光免疫分析仪进行扫描检测；

(3)分别将检测带(T)和质控带(C)的信号强度一次赋于T和C，则T/C为样本中cTnI检测值；

(4)校准曲线：分别用不同浓度的校准液加入本发明试纸进行测定，用不同浓度测定的T/C值作为Y轴，标定浓度为X轴建立标准曲线并确定出计算公式；

(5)根据每个待测样本的T/C值与标准曲线及浓度计算公式即可得出各待测样本中cTnI浓度。

本发明检测的原理是：

取待测样本加至样本垫上，通过毛细管现象，样本溶液向吸水垫方向扩散，当样本扩散至结合垫时，与结合垫上标记抗体的UCP微球发生免疫复合反应，形成的免疫复合物继续向前扩散，当与检测带上的抗体相遇发生免疫复合反应而截留，未结合的UCP免疫复合微球继续向前扩散至质控带，与质控带上的羊抗兔IgG发生反应而被截留，当样本溶液扩散至指示终点时，终点指示贴由于PH值的改变而显色，说明试纸卡反应完全，通过UPT扫描仪扫描检测带和质控带计算其待测样本中cTnI浓度。

本发明具体实施方式

1.肌钙蛋白I(cTnI)不同肽段抗体的制备