[发明专利]一种发酵制备A82846B的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵生产技术领域，涉及糖肽类抗生素的发酵方法，具体涉及一种通过发酵制备获得A82846B的方法。

背景技术

糖肽抗生素是由微生物产生，或由微生物产生并进行部分修饰的一大类物质。万古霉素和替考拉宁为市售的抗菌产品。在上世纪九十年代发现的糖肽中，包括称作A82846A（也称作ereomomycin）、A82846B（也称作氯东方霉素chloroorienticinA）、A82846C（也称作东方霉素orienticinC）及东方霉素A。已经对天然存在的糖肽进行了多种修饰，其中一种是对糖肽中的反应性胺的还原烷基化的修饰。

2014年8月7日FDA批准抗生素奥利万星(oritavancin)用于由敏感革兰氏阳性菌导致的急性细菌性皮肤和皮肤结构感染成人患者的治疗。奥利万星是一种单剂量治疗方案的抗生素,具有良好的市场前景。

A82846B是合成奥利万星的关键中间体，可由东方诺卡菌(Nocardiaorientalis)发酵产生。除了A82846B，东方诺卡菌发酵时还会产生两种主要成分A82846A和A82846C，其结构式如下：

A82846A分子式为C₇₃H₈₉N₁₀O₂₆Cl,A82846B分子式为C₇₃H₈₈N₁₀O₂₆Cl₂,A82846C分子式为C₇₃H₉₀N₁₀O₂₆。

由上可知，三种物质结构非常接近，分离纯化工作相当困难，发酵液中A82846B的组分比例（A82846B在三种物质中所占比例）的高低将极大影响提取收率。目前我国关于A82846B的研究较少，发酵单位和组分比例都较低，导致生产成本居高不下。

发明内容

本发明公开了一种发酵制备A82846B的新方法，通过优化A82846B发酵的工艺，不仅提高了发酵单位，而且也提高了A82846B的组分比例，提高了收率。

使用东方诺卡菌(Nocardiaorientalis)发酵A82846B工艺中，最大的难点在于A82846A、A82846B、A82846C结构极其相似，分离纯化相对困难，使得生产成本非常高，本发明技术人员经过大量的研究工作，发现提高培养基中氯的含量有助于提高A82846B的发酵单位和组分比例。

虽然现有的发酵工业中，在发酵培养基中常常添加氯化盐，常见如氯化钠，但添加的主要目的提供阳离子来参与酶的组成、调节酶的活性，另一个重要的添加目的是维持发酵培养基的渗透压，并没有说明添加氯化盐对于利用东方诺卡菌发酵A82846B的发酵单位和组分比例有任何影响。

本发明技术人员通过大量的研究工作，发现添加氯化盐的种类和采用何种添加方式以及添加多少都对A82846B的发酵单位和组分比例有较大影响。

本发明所述发酵制备A82846B的新方法为利用东方诺卡菌进行发酵，在发酵培养基中加入氯化盐以提高氯离子，从而来提高A82846B在整个发酵产物中的比例，提高收率，降低成本。

本发明所述的氯化盐可为任何可提供氯离子的无机盐，优选氯化钠、氯化钾、氯化钙和氯化铵中的一种或多种。

本发明所述发酵培养基为本领域技术人员在利用东方诺卡菌进行发酵时所使用的常规发酵液。

本发明所述的氯化钠的添加浓度为0.2-0.8%。优选的，添加浓度为0.4-0.6%。

本发明所述的氯化钾的添加浓度为0.25-1%。优选的，添加浓度为0.5-0.75%。

本发明所述的氯化钙的添加浓度为0.6-1.2%。优选的，添加浓度为0.8-1%。

本发明所述的氯化铵的添加浓度为0.2-0.8%。优选的，添加浓度为0.4-0.6%。

本发明所述的添加方式是在发酵开始前一次性加入发酵培养基中。

本发明技术方案优选的发酵实施过程是，在发酵培养基中加入0.5%氯化钠、0.625%氯化钾、0.9%氯化钙和0.5%氯化铵，接入成熟种子后，在温度30℃、转速250rpm下摇瓶培养5天，液相分析。

具体实施例

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不意味着对本发明有任何限制。