[发明专利]一种双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种双试剂糖化血红蛋白检测试剂盒，属于生物技术领域。

背景技术

糖化血红蛋白(Hba1c)是人体血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物，血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进行测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制水平。

糖化血红蛋白与血糖的控制情况：4％～6％，血糖控制正常；6％～7％，血糖控制比较理想；7％～8％，血糖控制一般；8％～9％，控制不理想，需加强血糖控制，多注意饮食结构及运动，并在医生指导下调整治疗方案；>9％，血糖控制很差，是慢性并发症发生发展的危险因素，可能引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有可能出现酮症酸中毒等急性合并症。

目前监测糖化血红蛋白方法非常多，目前市场上主要为HPLC法、胶乳免疫比浊法(直接&间接)、酶法等。其中，HPLC方法作为检测糖化血红蛋白的金标准方法被广泛采用，但成本较高；酶法准确度较差；胶乳免疫比浊法因为能够用于全自动生化分析仪，通量高，且结果比酶法准确，价格相比HPLC方法低，能够进行大规模体检使用，近年逐渐受到国内外市场亲睐，需求增长迅速；胶乳免疫比浊间接法测定，分别测定样本中的糖化血红蛋白含量以及血红蛋白总含量，人工或者仪器自动计算出糖化血红蛋白含量百分比；该方法由瑞士Roche公司申请了相关专利，且需要测定两个指标，价格较高，通量降低一倍。

胶乳免疫比浊直接法测定：采用空白胶乳颗粒(Particles)吸附被测样本中的血红蛋白，然后加入特异性识别糖化血红蛋白(HbA1C)的单克隆抗体及对应二抗(通常二抗为羊/兔抗鼠IgG抗体)可以按照免疫比浊原理形成抗原抗体复合物(Complexes)，并通过全自动生化仪检测信号值，相同方法测定已知百分比的糖化血红蛋白标准品可以绘制标准曲线，仪器将样本信号值与标准曲线比较即直接可报告样本中的糖化血红蛋白百分比，即为直接法，直接法诞生初期因准确度高，速度快，价格低廉，市场快速增长。但是，应用过程中逐渐暴露了一些该方法的致命缺点，因为二抗与对应单抗形成免疫复合物后容易导致单抗失活，特异性识别糖化血红蛋白(HbA1C)的单克隆抗体和对应二抗不能较长时间(2～8度一个月)稳定的存在于同一体系中，绝大部分试剂厂商将特异性识别糖化血红蛋白(HbA1C)的单克隆抗体(下述传统试剂2)和对应二抗(下述传统试剂3)分别包装存储，需要使用前由检验人员混匀使用。缺点：第一，由于操作差异，导致不同人混合的试剂测试结果有差异；第二，混匀后试剂存储稳定性不长，不利于使用。原理见图1、2、3。

图1中，市面常见的直接法HbA1C测定试剂盒，在使用前由操作人员提前将HbA1C单抗(传统试剂2)和二抗(传统试剂3)混合形成单抗/二抗免疫复合物，但该复合物无法长期稳定存在，不到一周，HbA1C单抗就逐渐失活，不仅导致测定信号大幅度下降，甚至长期存放的单抗/二抗免疫复合物检测时会出现HOOK效应。

图2中，样本中的血红蛋白和糖化血红蛋白在全自动生化分析仪反应杯中，37℃条件下，被吸附到糖化血红蛋白测定试剂盒的通用试剂1(空白胶乳溶液)上的空白胶乳颗粒上。

图3中，市面常见的直接法HbA1C测定试剂盒，在自动化仪器上，试剂1(空白胶乳溶液)与样本混合物与单抗/二抗免疫复合物发生抗原抗体反应，形成最终免疫复合物，免疫复合物的多少与糖化血红蛋白含量的百分比成正比关系，在免疫比浊测定中，最终免疫复合物的多少与仪器信号值成正比，通过与同样方法测定的已知浓度的标准品比较信号值，自动化仪器可以直接计算出被测样本中的糖化血红蛋白含量百分比。

解决方法:目前针对上述问题，已经出现了使用多聚单克隆抗体Muti-Mab替代传统试剂2和传统试剂3的方式，但是，多聚单克隆抗体技术目前尚不成熟，导致批间差难以控制，目前尚处于研究阶段，并未应用于生产。原理见图2、4。

图4中，与市面常见的直接法HbA1C试剂盒不同，采用多聚糖化血红蛋白单克隆抗体的检测方法，不需要提前准备HbA1C单抗(传统试剂2)和二抗(传统试剂3)的混合物，方法简便，且测定不受人力因素影响，但多聚抗体技术不成熟，目前尚不能大规模生产多聚抗体。

发明内容