[发明专利]一种重组基因VII型新城疫多表位疫苗

说明书

本发明涉及一种重组基因VII型新城疫多表位疫苗的制备与应用。所述疫苗以基因VII型新城疫病毒主要囊膜糖蛋白：融合蛋白(F)、血凝素‑神经氨酸酶蛋白(HN)及核衣壳蛋白(NP)Th表位、CTL表位以及B细胞表位作为疫苗框架结构，通过柔性linker连接，克隆入pRSETA载体后转化大肠杆菌，经过发酵、纯化、乳化等工艺，获得具有理想免疫原性的新城疫多表位疫苗。动物实验表明，重组基因VII型新城疫多表位疫苗不仅安全性良好，而且能够激发有效的体液免疫与细胞免疫反应。

技术领域

本发明属于生物技术基因工程领域，主要涉及一种重组基因VII型新城疫多表位疫苗制备与应用。具体地，利用基因重组技术，将与新城疫病毒感染有关的两个主要囊膜糖蛋白：融合蛋白(F)、血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)及核衣壳蛋白(NP)的B细胞表位、Th表位以及CTL表位串联，并克隆入载体，转化宿主菌，经过发酵、纯化、乳化工艺制备，得到重组新城疫多表位疫苗以及该疫苗在预防新城疫中的应用。

背景技术

NDV属于副粘病毒科，副粘病毒属病毒，是由NDV(Newcastle Disease Virus) 引起的侵害禽类的一种高度接触性、急性、烈性传染病，是威胁世界养禽业的主要疾病之一，被国际兽疫局(OIE)列为A类传染病，可感染大多数禽类。我国于1948年首次分离到NDV，至今ND在我国全国范围内发病仍然比较普遍，制约着我国养禽业的发展及禽产品的出口，也对食品安全及人类健康存在潜在的危害。尽管新城疫免疫接种已经普及多年并己基本上控制了典型新城疫的流行，但非典型ND仍时有发生。

基因VII型NDV自20世纪80年代早期就已经在东亚流行(Aldous.et al.， 2003)。1995年，我国台湾地区暴发了严重的ND大流行，Yang等证实了基因VII 型NDV是造成台湾地区 1995年至今ND流行的主要病原。严维巍等首次报道了基因VII 型在大陆的存在。Liu XF等对1985-2001年中国部分地区鸡群和鹅群中分离到的新城疫毒株基因型分析发现，29株NDV中有14株属于基因VII型；Qin等从我国 1996-2005年全国各个地区鸡，鸭、鹅体内分离到30株NDV，其中17株属于基因 Vll型；Liu H L等对2005年NDV分离株分析发现，基因VII型毒株占分离总数的 77％；Zhang rui等根据我国2001-2009年分离到的17株NDV发现基因VII型NDV 所占的比重呈逐年上升的趋势。随着时间的推移，基因VII型分离株逐渐变为优势毒株。

新城疫病毒是有囊膜的单股负链RNA病毒，基因组为15kb，编码至少六种蛋白，顺序为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，分别为核衣壳蛋白(NP蛋白)、磷蛋白(P蛋白)、基质蛋白(M蛋白)、融合蛋白((F蛋白)、血凝素-神经氨酸酶(HN蛋白)、大分子蛋白((L 蛋白)。NDV中有两个主要的成分-融合蛋白(F)和血凝素一神经氨酸酶(HN)都与病毒感染有关。HN介导病毒与宿主细胞受体的结合，使病毒吸附到细胞膜上；F介导病毒囊膜与宿主细胞浆膜的融合，促进病毒的穿入，还可以促进病毒在细胞间的感染。 F和HN均是病毒囊膜上的糖蛋白，均能产生中和抗体，都是重组疫苗的候补对象。研究人员发现将NDV F和HN基因插入FPV中构建重组病毒，FPV-NDV-F和 FPV-NDV-HN均可提供对发病和死亡的保护。Iritani等(1991)证明常规NDV疫苗和重组FPV-NDV结合使用比单独使用免疫效果好，Taylor等(1996)构建了表达NDV F 和HN基因的重组禽痘病毒，无论将其用于SPF鸡还是商品鸡都能有效的保护鸡抵抗强毒的攻击。