[发明专利]四溴双酚A人工免疫原TBBPA-BSA的制备及用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种四溴双酚A人工免疫原TBBPA-BSA的制备方法及用途，具体是一种用于有机污染物四溴双酚A免疫检测的溴代阻燃剂——四溴双酚A的人工免疫原TBBPA-BSA的制备方法及用途。

背景技术

溴代阻燃剂(BrominatedFlameRetardant，BFRs)是指能使聚合物不容易着火或者着火后使其燃烧变慢的一种助剂。溴代阻燃剂是目前世界上产量和用量最大的有机阻燃剂之一。其中，四溴双酚A(简称TBBA或TBBPA或TBA)是目前我国有机溴代阻燃剂主要产品，也是世界上用量第二大的溴代阻燃剂，它主要是由双酚A溴化所得。全球四溴双酚A的产量从1994年的0.64万吨增加到2012年的2万吨，并在电子产品、纺织品、建筑装潢材料等各种制造业产品和材料中广泛使用；此外，随着这些产品的使用，TBBPA可以慢慢逸散到环境中。

国内外广大环境学者对各种环境介质和生物样品中TBBPA的浓度和毒性效应做了大量研究。研究表明，TBBPA可以在各种水体、底泥、土壤、大气等各种环境介质中存在，并可以随气溶胶远距离迁移。在不同营养级生物体内含量变化表现出明显的生物富集性，并对生物体有毒性和内分泌干扰性。TBBPA的污染能力有很高的持久性，主要危害有三点：首先，长期接触会妨碍大脑和骨骼发育；其次，被焚化处理时，会释放出有高致癌性的溴化二恶英和呋喃。因此，研究认为TBBPA是潜在的具有持久性、生物累积性和毒性(PBT-persistentbioaccumulativetoxie)的化合物。早在2003年，TBBPA就已经引起世界绿色和平组织的重视。欧盟关于环保的“2个指令”起初计划限制所有溴代阻燃剂的使用，并设想以磷、氮替代，但因氮、磷资源缺乏，个别性能远不能满足需求以及可能造成水体的富营养化的潜在风险，而未将TBBPA纳入。目前，TBBPA已作为危害物质被列入《东北大西洋海洋环境保护条例》OSPAR的名录中。

目前，关于TBBPA的研究主要集中在水体、沉积物、大气等环境领域和生物体的毒性方面，但样品的检测方法方面研究较少。目前对四溴双酚A的检测手段主要为气相色谱和高效液相色谱等仪器检测方法，这些方法虽然准确可靠，但对样品的预处理方法和操作人员的专业性有很高的要求。正因为这些方法的处理复杂、耗时、仪器价格昂贵而不适合推广使用，也不利于在环境污染事故现场快速检测。为克服这些缺点，寻求一种快速、简便、灵敏且经济实用的分析方法就成为环境监测领域的主要研究方向。因此，开展研究并建立有效、可靠的含溴阻燃剂的检测方法及标准，并通过相关的法规予以保障，成为一项极为重要和迫切的工作。

20世纪60年代发展起来的免疫分析(Immunoassay,IA)是基于抗原和抗体的特异性、可逆性结合反应的分析技术。免疫分析具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高灵敏性，非常适合复杂介质中痕量组分的分析。因此免疫分析具有的特异性强、灵敏度高、方法快捷简单、分析通量大、检测成本低等优点，使得该类方法可以满足简单、快速、灵敏地检测持久性有机污染物的要求。1985年美国Cetus公司的K.B.Mullis和R.K.Saiki等发明了一种特异性DNA体外扩增技术，成为PolymeraseChainReaction，简称PCR，即聚合酶链式反应。1992年Sano等将免疫分析技术与PCR技术结合，发展出荧光免疫PCR技术。荧光免疫PCR技术兼具了免疫分析的特异性强和PCR技术的灵敏度高(检测限高达10^-11～10^-12g/L)的特点，可用于检测环境中痕量污染物。

目前，尚无用荧光免疫PCR技术检测TBBPA的相关报道。而制备合格的TBBPA抗原是生物免疫得到高特异性抗TBBPA抗体的前提，更是建立TBBPA免疫检测分析方法的关键，这将具有重要的应用价值和理论研究意义。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是首次提供一种步骤简单，速度快，产率高的四溴双酚A人工免疫原TBBPA-BSA制备方法，为免疫得到特异性抗体和利用人工抗原、抗体建立免疫检测方法奠定基础。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种四溴双酚A人工免疫原TBBPA-BSA，结构如式I所示：

其中BSA为牛血清蛋白。

本发明还提供了一种四溴双酚A人工免疫原TBBPA-BSA的制备方法，包括以下步骤：

TBBPA半抗原与载体蛋白BSA偶联制备TBBPA-BSA。